СТРУКТУРА И СТАБИЛЬНОСТЬ ГЛУТАМИНСВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА ИЗ Escherichia coli
И ЕГО КОМПЛЕКСА С ГЛУТАМИНОМ
Ольга В. Степаненко,1 И. М. Кузнецова,1 К. К. Туроверов,1
В. Скогнамиглио,2 М. Стаяно,2 С. Д'Ауриа 2
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия, и
2 Институт биохимии белка, Неаполь, Италия;
1 электронный адрес: kkt@mail.cytspb.rssi.ru
В работе исследованы конформационные изменения гпутаминсвязывающего белка из Escherichia coli (GlnBP) под
действием гуанидинтидрохлорида (GdnHCl) и влияние комплексообразования GlnBP с глутамином (Gln) на эти процессы. Исследования
выполнены методами собственной УФ-флуоресценции белков, флуоресценции АНС, кругового дихроизма (КД) в дальней и ближней
УФ-областях спектра. Интерпретация экспериментальных данных проведена с учетом результатов анализа микроокружения триптофановых
и тирозиновых остатков. Это позволило объяснить незначительный вклад тирозиновых остатков в суммарную флуоресценцию нативного
белка, сходство флуоресцентных характеристик GlnBP и GlnBP/Gln и необычный эффект превышения интенсивности триптофановой
флуоресценции (длина волны регистрации 365 нм) при возбуждении светом с длиной волны 297 нм по сравнению с флуоресценцией при
возбуждении светом с длиной волны 280 нм. Этот эффект объяснен спектральной зависимостью относительного вклада Trp 32 и Trp 220
в поглощение белка. Показано, что зависимость триптофановой флуоресценции белка от длины волны возбуждения должна приниматься в
расчет при оценке вклада тирозиновых остатков в суммарную флуоресценцию белка и в принципе может быть использована при разработке
подхода для разложения многокомпонентного спектра флуоресценции белков на составляющие - спектры флуоресценции отдельных
триптофановых остатков. Использование параметрического представления флуоресцентных данных показало, что разворачивание как
GlnBP, так и GlnBP/Gln является трехстадийным процессом (N → I1 → I2 → U), хотя в случае
комплекса GlnBP/Gln эти три стадии существенно перекрываются. Процесс N → I1 происходит при больших концентрациях
GdnHCl для комплекса GlnBP/Gln по сравнению с GlnBP. Несмотря на сложный характер процесса разворачивания GlnBP, оно полностью
обратимо.
Ключевые слова: глутаминсвязывающий белок, фолдинг белков, стабильность белков, собственная флуоресценция
белков
Back
Contents
Main
|
