Цитология  2016  58 (3) : 192–200
ОТВЕТ КЛЕТОК ПЕРЕВИВАЕМЫХ ЛИНИЙ КАРЦИНОМЫ ЛЕГКОГО (А-549) И ЭНДОТЕЛИЯ (ECV-304) ЧЕЛОВЕКА НА ЗАРАЖЕНИЕ ВИРУСОМ ГРИППА А ПРИ РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНИ ИНФИЦИРОВАННОСТИ КЛЕТОК

Д.М. Даниленко,1 С.С. Смирнова,1 Т.Д. Смирнова,1,* М.М. Писарева,1 М.А. Плотникова,1 А.О. Дурнова,2 М.Ю. Еропкин 1

1 Научно-исследовательский институт гриппа Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, 197022, и 2 Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта, Санкт-Петербург, 199034;
* электронный адрес: cellcultures@influenza.spb.ru

Путь, по которому пойдет инфекционный процесс, зависит как от биологических характеристик вирусов и клеток, так и от интенсивности заражения клеток вирусом, т. е. множественности инфекции. Цель работы состояла в сравнительном изучении ответа двух клеточных линий человека — карциномы легкого (А-549) и эндотелия (ECV-304) — на заражение вирусом гриппа А при различной степени инфицированности клеток. На 1-м пассаже обе клеточные линии отвечали усилением пролиферации и индукцией апоптоза только на низкие дозы заражения вируса гриппа (1—10 ИД). В клетках А-549 стимулирующий эффект на низкие дозы вируса наблюдался на 1—2 сут раньше, чем в клетках ECV-304. Со 2-го по 4-й пассаж повышение пролиферации наблюдали в клетках обеих линий, исходно зараженных более высокими дозами вируса (100 и 1000 ИД). Более того, ответ клеток А-549 на заражение низкими дозами вируса гриппа А подтипа H3N2 зависел от условий поддержания вируса: усиления пролиферации клеток не наблюдалось в ответ на вирус, выращенный на куриных эмбрионах, в отличие от вируса, выращенного на клеточной культуре. Методом иммуноцитохимии показано, что в клетках А-549 на 3-и сут после заражения вирусом изменяется (зависимо от дозы заражения) внутриклеточная локализация белков р53 и циклина А, участвующих в прохождении клеточного цикла. При низкой дозе заражения вирусом в ядрах обнаруживался преимущественно циклин А (63 %), а при высокой дозе — белок р53 (54 %), что подтверждает стимуляцию клеточной пролиферации при очень низкой степени заражения клеток и задержку деления клеток при высокой степени инфицированности вирусом. Изучение репродукции вируса гриппа А в клетках А-549 и ECV-304 с применением разных вирусологических методов показало низкую чувствительность этих клеток к вирусу гриппа А, что выражалось в постепенном снижении экспрессии вирусных РНК и нарушении формирования полноценных вирусных частиц в течение нескольких пассажей. Таким образом, при снижении множественности инфекции клеток А-549 и ECV-304 нарушается репродукция полноценных вирусных частиц или синтез отдельных вирусных белков, что сопровождается усилением клеточной пролиферации и индукцией апоптоза. В результате сравнительного изучения двух клеточных линий (А-549 и ECV-304) при заражении разными дозами вирусов гриппа А выявлены как общие закономерности, так и специфические различия, свидетельствующие о роли биологических особенностей вирусов, клеток и множественности инфекции клеток в развитии инфекционного процесса.

Ключевые слова:  клеточные линии A-549 и ECV-304, вирус гриппа А, пролиферация клеток, апоптоз, инфицирующая доза, экспрессия вирусной РНК


|  Full text  |  Back  |  Contents  |  Main  |