КУЛЬТИВИРОВАНИЕ СПЕРМАТОГОНИЙ ХРЯКА НА КЛЕТКАХ СЕРТОЛИ
И.П. Савченкова,1 С.А. Васильева
Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, Москва, 109428;
1 электронный адрес: s-ip@mail.ru
Изучали in vitro влияние клеток Сертоли на сперматогонии хряка, которые были выделены из тестикул помесных хряков 60-суточного возраста. Для обогащения культуры
сперматогониями клетки очищали центрифугированием в разных градиентах плотности, используя прерывистый градиент Перколла, с последующим разделением клеток
по адгезии. В клетках Сертоли хряка обнаружены липидные капли, которые окрашивались жировым красным О. Эксперименты показали, что культивирование сперматогоний
хряка в присутствии клеток Сертоли (вплоть до 35 сут) приводит к их дифференцировке так же, как и в естественных условиях в яичке. На 10-е сут культивирования клетки
объединяются в группы, формируются цепочки и суспензионные кластеры сперматогенных клеток. В это время формируются сперматогенные колонии, которые анализировали
по экспрессии генов Nanog и Plzf с помощью ПЦР в реальном времени. Экспрессия гена Nanog в экспериментальных клеточных клонах, полученных
при краткосрочном культивировании сперматогониевых клеток в присутствии клеток Сертоли, превышала экспрессию этого гена в свежеизолированных сперматогониевых
клетках в 200 раз. Продукт экспрессии гена Plzf обнаружен как в свежеизолированных половых клетках, так и в полученных клеточных клонах in vitro. При более
длительном культивировании сперматогоний на клетках Сертоли наблюдали процесс дифференцировки in vitro в направлении сперматогенеза и формирование единичных
подвижных спермиев хряка на 30-33-и сут. На этом этапе клеточная популяция характеризовалась гетерогенностью. Дифференцировка сперматогониевых клеток хряка без
клеток Сертоли останавливалась в культуре на 7-е сут культивирования. Результаты демонстрируют, что культивирование сперматогоний хряка на клетках Сертоли
способствует их дифференцировке в направлении сперматогенеза in vitro и может облегчить получение культуры половых клеток хряка.
Ключевые слова:
сперматогенез, тестикулы хряка, сперматогониевые клетки, клетки Сертоли, фидерный слой, дифференцировка, экспрессия генов
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
