ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ПРЕДОБРАБОТКИ ПРЕПАРАТОВ НА ВЫЯВЛЕНИЕ 5-МЕТИЛЦИТОЗИНА В МЕТАФАЗНЫХ ХРОМОСОМАХ
И ИНТЕРФАЗНЫХ ЯДРАХ IN SITU
Н.А. Грудинина,1 Л.К. Сасина,1 Е.М. Нониашвили,1 E.Г. Неронова,2
Л.И. Павлинова,1,3 И.О. Сучкова,1 Г.А. Софронов,1 Е.Л. Паткин 1,*
1 Институт экспериментальной медицины РАН, Санкт-Петербург, 194376,
2 Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС
РФ, Санкт-Петербург, 197136, и 3 Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, Санкт-Петербург, 199034;
* электронный адрес: elp44@mail.ru
Качественный и количественный анализ метилирования ДНК in situ на уровне клетки, хромосомы и
хромосомного домена крайне важен для диагностики и лечения различных заболеваний, изучения старения
и последствий воздействия окружающей среды. При этом вопрос о том, насколько выявляемые in
situ закономерности метилирования обусловлены собственно метилированием ДНК per se или (и) доступностью
ДНК для антител, зависящей от особенностей структуры хроматина и конденсации хромосом,
остается открытым. Указанные явления могут вести к неправильной оценке собственно паттерна
метилирования ДНК. Чтобы избавиться, насколько возможно, от этого недостатка, мы модифицировали
наиболее широко используемый метод выявления метилцитозина in situ с помощью моноклональных
антител. В настоящей работе мы показали, что мечение 5-метилцитозина в центромерном гетерохроматине,
хромосомных плечах и сестринских хроматидах при иммунохимическом исследовании с помощью
флуоресцентных антител в значительной степени зависит от условий предобработки препаратов
хромосом. На недифференцированных клетках эмбриональной тератокарциномы мыши линии F9 обнаружено,
что изменение условий хранения препаратов ведет к резкому уменьшению, вплоть до исчезновения,
интенсивности флуоресценции сигнала в центромерном гетерохроматине. С помощью описанного
в работе метода на хромосомах клеток F9 и лимфоцитов периферической крови человека впервые было
обнаружено наличие асимметрии метилирования сестринских хроматид. Это может приводить к
асимметрическим клеточным делениям и асимметричному транскрипционному статусу дочерних клеток.
Предлагаемые модификации метода выявления 5-метилцитозина in situ позволяют получить более
полную характеристику метилирования хромосом и хромосомных участков.
Ключевые слова:
клетки эмбриональной карциномы мыши линии F9, лимфоциты периферической
крови человека, метилирование ДНК, гетерохроматин, метафазные хромосомы, эпигенетическая
регуляция, in situ-анализ, иммуноцитохимия, моноклональные антитела к метилцитозину, асимметричное
метилирование сестринских хроматид
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
