ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОЧНЫХ СФЕРОИДОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ЛИНИЙ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК,
ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ КОСТНОГО МОЗГА И ЗАЧАТКА КОНЕЧНОСТИ РАННЕГО ЭМБРИОНА ЧЕЛОВЕКА
Т.А. Крылова, А.С. Мусорина, В.В. Зенин, Г.Г. Полянская 1
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, 194064;
1 электронный адрес: poljansk@mail.cytspb.rssi.ru
Получены клеточные сфероиды из клеток линий мезенхимных стволовых клеток, выделенных из
костного мозга (FetMSC) и зачатка конечности (M-FetMSC) раннего эмбриона человека. Проведен сравнительный
анализ характеристик этих линий при 2-мерном (2D) культивировании в монослое и 3-мерном
(3D) в сфероидах. Кроме того, сравнивали сфероиды FetMSC и M-FetMSC. Характеристики клеточных
сфероидов получали через 48 ч после их образования из монослойных культур на 6-м пассаже после
декриоконсервации. Сфероиды в отличие от 2D-культур представляют собой гетерогенную
клеточную популяцию, состоящую как из фибробластоподобных, так и из эпителиоподобных клеток.
2-суточные сфероиды являются активно пролиферирующими структурами. С помощью проточной цитофлуориметрии
проведен сравнительный анализ поверхностных маркеров, характерных для МСК, в
монослойных культурах (2D) и клеточных сфероидах (3D) линий FetMSC и M-FetMSC. Анализ показал
отсутствие принципиальных различий между линиями и их производными по наличию экспрессии маркеров,
характерных для МСК человека (CD44, CD73, CD90, CD105 и HLA-ABC) и отсутствию экспрессии
антигенов CD34 и HLA-DR. Тем не менее уровень экспрессии антигенов CD90 и CD105 ниже в клеточных
сфероидах, чем в cоответствующих 2D-культурах. Иммунофлуоресцентный и цитофлуориметрический
анализ экспрессии поверхностных маркеров и транскрипционных факторов, характерных для
ЭСК человека, показал присутствие в 2D- и 3D-культурах экспрессии Sox-2 и SSEA-4, отсутствие в
2D-культурах экспрессии Oct-4 и увеличение ее в сфероидах. Иммунофлуоресцентный анализ выявил
экспрессию маркеров ранней дифференцировки в производные трех зародышевых листков, характеризующих
ЭСК, в клеточных сфероидах обеих линий, что было ранее показано для монослойных культур
FetMSC и М-FetMSC. Показана способность обеих линий и клеточных сфероидов дифференцироваться
в остеогенном, адипогенном и хондрогенном направлениях. Но обнаружен ряд различий между монослойными
культурами и сфероидами. Показано, что адипогенная дифференцировка активнее идет в клеточных
сфероидах, полученных из M-FetMSC, по сравнению с соответствующей монослойной культурой.
Показаны различия между 2D- и 3D-культурами по характеру хондрогенной дифференцировки.
Полученные результаты подтверждают статус МСК для клеточных сфероидов, полученных из монослойных
культур МСК линий FetMSC и М-FetMSC и свидетельствуют, по-видимому, о частичном расширении
их дифференцировочного потенциала по сравнению с монослойными культурами.
Ключевые слова:
мезенхимные стволовые клетки человека, клеточные сфероиды, иммунофлуоресцентный
анализ, поверхностные клеточные маркеры, транскрипционные факторы, дифференцировка
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
