ИНГИБИТОРЫ МАР-КИНАЗНОГО ПУТИ U0126 И PD98059
ПО-РАЗНОМУ ВЛИЯЮТ НА ОРГАНИЗАЦИЮ ТУБУЛИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА
ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ЭНДОЦИТОЗА РЕЦЕПТОРА ЭФР
М.В. Злобина,1 Ю.Ю. Стеблянко,1,2 М.А. Шкляева,1,2 М. В. Харченко,1
А.В. Салова,1 Е.С. Корнилова 1,2,*
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург,
и 2 Кафедра цитологии и гистологии С.-Петербургского государственного университета;
* электронный адрес: elena.kornilova@gmail.com
Для проверки гипотезы об участии ЭФР-стимулируемой МАР-киназы ERK1/2 в регуляции функционирования
системы микротрубочек (МТ) изучено влияние двух широко применяемых ингибиторов
ERK1/2—U0126 и PD98095—на организацию тубулинового цитоскелета в интерфазных культивируемых
клетках линии HeLa в ходе эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов. Оказалось, что добавление
на 30 мин U0126 или PD98059 к не стимулированным ЭФР клеткам не влияло на радиально организованную
систему МТ. Однако уже через 15 мин после стимуляции эндоцитоза ЭФР в случае предварительного
добавления ингибитора U0126 число МТ уменьшалось вплоть до полной их деполимеризации.
Если же стимуляцию эндоцитоза ЭФР поводили в присутствии PD98059, незначительная деполимеризация
МТ через 15 мин наблюдалась в основном с минус-концов МТ, в то время как примембранные участки,
напротив, стабилизировались, о чем свидетельствовала высокая степень ацетилирования тубулина,
и такая картина сохранялась в течение всего времени эксперимента. Выяснилось также, что ингибиторы
влияют и на динамику эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов. Количественный анализ
показал, что после стимуляции эндоцитоза в присутствии U0126 формируется большее число эндосом
(по сравнению с контролем), незначительно изменяющееся в течение всего времени эксперимента; эндосомы
локализуются в примембранной области. Под действием PD98059 эндосом формировалось меньше,
чем в контроле, при этом, несмотря на наличие отдельных интактных МТ, они медленнее кластеризовались
(перемещались в околоядерную область клетки). Оба ингибитора существенно уменьшали
ассоциацию с белком слияния ранних эндосом ЕЕА1, что свидетельствует о замедлении слияний и созревания
эндосом в обоих случаях. Показано также, что влияние ингибиторов на появление фосфорилированых
форм ERK1/2 различно: U0126 полностью подавлял появление фосфо-ERK1/2; в присутствии
PD98059 через 15 мин после стимуляции эндоцитоза обе формы ERK резко активировались, а через
60 мин оставалась активной только ERK2. В обоих случаях динамика активации МАР-киназ существенно
отличалась от контрольной. Результаты указывают на участие ЭФР-стимулированного МАР-киназного
каскада в регуляции цитоскелета. В то же время они демонстрируют неэквивалентность двух исследованных
нами и широко применяемых ингибиторов по отношению к влиянию не только на активность
МАР-киназы, но и на такие взаимосвязанные процессы, как изменения организации цитоскелета и
динамика эндоцитоза сигнального рецептора.
Ключевые слова:
микротрубочки, эндоцитоз, эндосомы, рецептор ЭФР, ERK1/2, U0126, PD98095, клетки линии HeLa
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
