МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СУБЪЕДИНИЦ ПРОТЕАСОМ, ОБЛАДАЮЩИХ ЭНДОРИБОНУКЛЕАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
А.Г. Миттенберг,1,* Т.Н. Моисеева,1 В.О. Кузык,1 Е.П. Подольская,2
И.Н. Евтеева,1 Н.А. Барлев 1,3
1 Институт цитологии РАН, 2 Институт аналитического приборостроения РАН, Санкт-Петербург, Россия,
и 3 Отдел биохимии Университета Лестера, Великобритания;
* электронный адрес: a.mittenberg@gmail.com
Протеасомы выступают в качестве основного нелизосомального аппарата внутриклеточного протеолиза и принимают участие в регуляции большинства важнейших
клеточных процессов. Несмотря на значительный прогресс в понимании функционирования протеасом, некоторые вопросы, в частности РНКазная активность этих
рибонуклеопротеиновых комплексов и ее регуляция, остаются малоисследованными. В настоящей работе обнаружено, что ряд белков, соответствующих по
электрофоретической подвижности субъединицам 20S корового комплекса протеасом, обладает эндорибонуклеазной активностью по отношению к смысловой и
антисмысловой последовательностям 3'-НТР мРНК c-myc. Масс-спектрометрический анализ триптических гидролизатов данных белков показал присутствие в
пробах субъединиц 20S протеасомы - α1 (PSMA6), α5 (PSMA5), α6 (PSMA1) и α7 (PSMA3). Выявлены ряд новых сайтов фосфорилирования
субъединиц α1 (PSMA6) и α7 (PSMA3), а также существование формы субъединицы α5 (PSMA5) с делецией 20 N-концевых аминокислотных
остатков. Наблюдаемые различия в проявлении индивидуальными субъединицами эндонуклеазной активности, по-видимому, объясняются посттрансляционными
модификациями данных белков, в частности фосфорилированием. Показано, что специфичность РНКазной активности изменяется при дефосфорилировании протеасом,
а также под влиянием катионов Са и Mg. Сделаны выводы о влиянии статуса ПТМ субъединиц протеасом на специфичность их РНКазной активности.
Ключевые слова: протеасомы, рибонуклеазы, стабильность мРНК, посттрансляционные модификации,
фосфорилирование, масс-спектрометрия
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
