АНАЛИЗ СУБПОПУЛЯЦИЙ ВЕЗИКУЛ, НЕСУЩИХ АУТОАНТИГЕН
РАННИХ ЭНДОСОМ ЕЕА1
М.В. Злобина,1 Р.С. Каменцева,2 Е.С. Корнилова,1,2 М.В. Харченко 1,*
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, и 2 С.-Петербургский государственный университет;
* электронный адрес: mariannakharchenko@gmail.com
Конфокальный иммунофлуоресцентный анализ интерфазных клеток HeLa показал, что аутоантиген
ранних эндосом ЕЕА1, участвующий в регуляции гомотипических слияний, ассоциирован с везикулами,
которые можно разделить на две субпопуляции по их размерам, локализации и уровню связывания с
ЕЕА1. Клетки в течение 12 ч до исследования вели на среде, лишенной сыворотки, для минимизации
лигандстимулируемого эндоцитоза ростовых сывороточных факторов. Первая субпопуляция представлена
в основном крупными везикулами, сильно декорированными ЕЕА1. Эти везикулы локализованы
преимущественно в околоядерной области. Эксперименты по разборке микротрубочек показывают, что
такая локализация обеспечивается тубулиновым цитоскелетом. Вторая субпопуляция представлена
многочисленными мелкими везикулами, которые слабо метятся антителами на ЕЕА1 и распределены в
основном по периферии цитоплазмы. Двойной непрямой иммунофлуоресцентный анализ фиксированных
клеток показал, что околоядерные везикулы, обогащенные ЕЕА1, полностью колокализуются с
ключевым белком ранних эндосом — малой ГТФазой Rab5, тогда как около половины слабо декорированных
ЕЕА1 периферических везикул негативны по Rab5. Обнаружено, что число Rab5-позитивных
везикул в расчете на клетку больше, чем везикул, несущих ЕЕА1. Таким образом, в лишенных сыворотки
клетках HeLa с низким уровнем эндоцитоза выявляются субпопуляция везикул, обогащенных ЕЕА1
и Rab5 (обозначаемых как EEA1+++/Rab5+), и субпопуляция слабо окрашенных ЕЕА1-везикул, которые
могут быть как Rab5-положительными, так и отрицательными (EEA1+/Rab5+ и EEA1+/Rab5–). Кроме
того, в клетках присутствует фракция везикул, ассоциированных только с Rab5 (EEA1–/Rab5+). Полученные
данные могут свидетельствовать о различной функциональной роли всех этих субпопуляций,
несущих белки, традиционно рассматриваемые как эквивалентные друг другу маркеры ранних эндосом.
Ключевые слова: ранние эндосомы, ЕЕА1, Rab5, конфокальная иммунофлуоресценция, клетки
HeLa
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
