АНОМАЛИИ МИТОЗА В ИМАГИНАЛЬНЫХ ДИСКАХ DROSOPHILA MELANOGASTER,
НЕСУЩИХ КОНСТРУКЦИЮ ГАШЕНИЯ ТРАНСКРИПЦИИ ОПУХОЛЕВОГО СУПРЕССОРА Dlg
Лебедева Л.И.,1 Дубатолова Т.Д.,1 Омельянчук Л.В. 1,2
1 Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН и 2 Новосибирский государственный университет;
электронный адрес: ome@mcb.nsc.ru
Изучено влияние сайленсирующей конструкции UAS-RNAi-dlg, индуцированной крыловым драйвером 1096-Gal4, на митоз, цитокинез и текстуру ядра
в крыловых имагинальных дисках. Конструкция представляет собой геномную инсерцию Р-элемента, содержащую UAS- промотор, который управляет
сайленсирующим элементом. Последний представлен кодирующим участком гена dlg и комплементарным к нему участком. Вместе они образуют шпильку
на уровне РНК, считываемой с этого элемена (Dietzl et al., 2007). Такая шпилечная РНК расщепляется эндогенным белком Dicer на несколько фрагментов РНК,
которые, в свою очередь, залипают на мРНК гена dlg. Далее эти комплексы расщепляются геномным Dicer, в результате чего мРНК dlg распадается. Использование
конструкции связано с изучением функции гена dlg. С этого гена считывается 21 транскрипт. Конструкция UAS-RNAi-dlg инактивирует 14 транскриптов -
RE, RH, RQ, RS, RG, RD, RL, RB, RK, RR, RT, RN, RA, RP - и не затрагивает 7 других - RO, RF, RI, RU, RJ, RC, RM. Это дает возможность изучить действие
считываемых с гена белков, которые содержат гуанилат-киназный домен IPR008145, расположенный на С-конце белка. Наиболее значимые последствия инактивации
гена dlg проявились в аномальной реализации событий на выходе из митоза: в подавлении цитокинеза и образовании двуядерных клеток. Наблюдались и другие
аномалии, приводящие к появлению анеуплоидных и полиплоидных клеток: трехполюсная анафаза, асинхронное расхождение сестринских хроматид к полюсам в
анафазе, отставание отдельных хромосом, микроядра. Количественные измерения флуоресцентных сигналов анти-Н3-р-антител и флуорохрома DAPI позволили выявить
нарушения фазовой специфичности текстуры ядра на входе и выходе из митоза, нарушение согласованности между процессами, управляющими компактизацией хроматина
и процессами, регулирующими прохождение клеток по фазам митоза. По результатам исследования высказано предположение об инактивации микротрубочкового пути
поляризации клеточного кортекса, как наиболее вероятной причине патологического митоза и цитокинеза в имагинальных дисках Drosophila при инактивации гена dlg.
Ключевые слова: Dlg; UAS-RNAi-dlg; драйвер 1096-Gal4; конфокальная микроскопия, митоз, цитокинез, текстура ядра
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
