АНАЛИЗ ДИНАМИКИ ЭНДОЦИТОЗА РЕЦЕПТОРА ЭФР НА ОСНОВЕ ОБРАБОТКИ ИЗОБРАЖЕНИЙ, ПОЛУЧЕННЫХ С ПОМОЩЬЮ КОНФОКАЛЬНОЙ
СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ НА ФИКСИРОВАННЫХ КЛЕТКАХ
М.В. Злобина,1 М.В. Харченко,1 Е.С. Корнилова 1,2
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург и 2 Санкт-Петербургский государственный университет;
электронный адрес: aquimaria@gmail.com
Эндоцитоз сигнальных рецепторов, в частности, рецептора ЭФР, начинаясь на плазматической мембране и заканчиваясь в общем случае деградацией в околоядерных
лизосомах, подразумевает множественные взаимодействия эндосом друг с другом и с различными компартментами (лизосомами, транс-сетью аппарата Гольджи), что
приводит к изменению размеров эндосом. Кроме того, характерной чертой эндоцитозного пути является перемещение эндосом с периферии клетки в околоядерную область.
Таким образом, эндоцитоз, как высокодинамический процесс, развивается во времени и пространстве. Очевидно, что одним из продуктивных подходов к изучению регуляции
эндоцитоза является метод световой иммунофлуоресцентной микроскопии, разрешение которой позволяет оценивать динамику этого процесса на уровне одной или
нескольких клеток. Различные воздействия, влияющие на регуляторные компоненты эндоцитоза, неизбежно отражаются на динамике изменения размеров эндосом и (или)
их перемещений, что позволяет выявлять как ключевые, так и вторичные компоненты регуляторных механизмов. Однако визуальная оценка подобных воздействий часто
оказывается весьма субъективной и не дает возможность как получить статистически достоверные данные, так и сравнить между собой несколько экспериментов даже
в одной серии. В настоящей работе введены такие параметры, как кажущиеся размеры везикул (величина диаметра, площади или объема) и число везикул на клетку,
позволяющие количественно оценивать эффективность слияний эндосом. Кроме того, предлагается коэффициент, отражающий кластеризацию везикул в околоядерной
области, как мера перемещения везикул по микротрубочкам к ядру (Dclust), и даны примеры применения предложенных параметров при анализе эндоцитоза
рецептора ЭФР.
Ключевые слова: рецептор ЭФР, ЕЕА1, эндосомы, микротрубочки, флуоресцентная конфокальная микроскопия, анализ изображений
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
