ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МУТАНТНОЙ ФОРМЫ D-ГЛЮКОЗА/D-ГАЛАКТОЗА-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА GGBP/H152C
С ПРИСОЕДИНЕННЫМ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ КРАСИТЕЛЕМ BADAN
А.В. Фонин,1,* Ольга В. Степаненко,1 О.И. Поварова,1 Е.А. Волова,1,2 Е.М. Филиппова,1,3
Г.С. Бубликов,1 И.М. Кузнецова,1,3 А.П. Демченко,4 К. К. Туроверов 1,3
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, 2 С.-Петербургский государственный университет,
3 С.-Петербургский государственный политехнический университет и
4 Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
* электронный адрес: alexfonin@incras.ru
Исследовано влияние различных факторов на физико-химические свойства и комплексообразование с глюкозой мутантной формы
D-глюкоза/D-галактоза-связывающего белка GGBP/H152C с присоединенным к цистеиновому остатку Сys 152 сольватохромным красителем BADAN.
Этот белок может рассматриваться как чувствительный элемент глюкометра. Точечная аминокислотная замена His 152 на Cys и присоединение BADAN
по этому положению более чем в 8 раз снижают сродство мутантной формы GGBP/H152C к глюкозе по сравнению с белком дикого типа, что позволяет
использовать эту мутантную форму для определения содержания сахара в биологических жидкостях, извлекаемых с помощью трансдермальных технологий.
Достаточно быстрое комплексообразование GGBP/H152C с глюкозой (даже в растворах с вязкостью 4 сПз время образования комплекса белок-Glc не превышает 3 с)
обеспечивает возможность своевременно отслеживать изменения концентрации сахара. Изменение ионной силы и рН раствора в пределах физиологического
диапазона значений этих величин не оказывает заметного влияния на флуоресцентные характеристики GGBP/H152C-BADAN. В области кислых значений рН часть
молекул GGBP/H152C находится в развернутом состоянии. Показано, что мутантная форма GGBP/H152C обладает относительно невысокой устойчивостью
к денатурирующему воздействию гуанидингидрохлорида. Этот результат позволяет сделать вывод о необходимости поиска более стабильных белков для
создания чувствительного элемента биосенсорной системы на глюкозу.
Ключевые слова: флуоресценция, биосенсор, глюкоза, флуоресцентный краситель
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
