ИССЛЕДОВАНИЕ КИНЕТИКИ ОБРАЗОВАНИЯ АМИЛОИДНЫХ ФИБРИЛЛ НА ОСНОВЕ ИНСУЛИНА
А.И. Сулацкая,1,* Е.А. Волова,1 Я.Ю. Комиссарчик,1 Е.С. Снигиревская,1
А.А. Маскевич,2 Е.А. Дробченко,1 И.М. Кузнецова,1,3 К.К. Туроверов 1
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург,
2 Гродненский государственный университет им. Я. Купалы, Белоруссия, и
3 Санкт-Петербургский государственный политехнический университет;
* электронный адрес: ansul@mail.ru
Исследование структуры упорядоченных белковых агрегатов - амилоидных фибрилл, влияния на-тивной структуры белка и внешних условий на процесс
фибриллообразования в настоящее время явля-ется предметом интенсивных исследований. Настоящая работа посвящена изучению кинетики образования
амилоидных фибрилл на основе инсулина при низких значениях рН (при которых производятся многие этапы выделения и очистки этого белка) с использованием
флуоресцентного зонда тиофлавина Т (ThT). Показано, что рост интенсивности флуоресценции ThT при формировании амилоидных фибрилл описывается сигмоидальной
кривой, на которой можно выделить 3 участка - лаг-фазу, рост и выход на плато, характеризующие различные этапы образования фибрилл. Несмотря на обнаруженный
разброс в протяженности лаг-фазы при одних и тех же условиях эксперимента (значениях pH и температуры), показано ее сокращение при перемешивании раствора
и введении затравки. Данные, полученные с использованием электронной микроскопии, свидетельствуют о том, что образующиеся фибриллы представляют собой
длинные неразветвленные нити диаметром ~20 нм. При увеличении времени инку-бации диаметр фибрилл не изменяется, в то время как длина их возрастает до 2-3 мкм,
что сопровож-дается значительным ростом количества агрегатов фибрилл. Все полученные экспериментальные данные свидетельствует о том, что вне зависимости
от кинетики образования свойства амилоидных фибрилл после завершения процесса фибриллообразования одинаковы. Результаты настоящей работы в сочетании с
выполненными ранее исследованиями амилоидных фибрилл на основе инсулина могут быть существенны для формирования представлений о механизме их образования,
а также для терапии амилоидозов, связанных с агрегацией инсулина.
Ключевые слова: амилоидные фибриллы, инсулин, тиофлавин Т, электронная микроскопия, интенсивность флуоресценции, спектры поглощения
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
