ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК СЕРТОЛИ В УСЛОВИЯХ ПОВЫШЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ И ГИПОКСИИ
А.Ю. Кулибин,1 Е.А. Малолина 2
1 Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН и 2 Научно-исследовательский институт вирусологии
им. Д.И. Ивановского Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, Москва;
1 электронный адрес: Kulibin.A.BKRJ@gmail.com
Клетки Сертоли (КС), полученные от половозрелых мышей линии C57Bl/6, были охарактеризованы при четырех различных условиях первичной культуры:
1) стандартных - 34 °С, 21 % O2 (культура 34_21); 2) при повышенной температуре - 37 °С, 21 % O2 (условие 37_21); 3) при гипоксии
- 34 °С, 5 % O2 (культура 34_5); 4) при сочетании обоих факторов - 37 °С, 5 % O2 (культура 37_5). Гипоксия способствует повышению
пролиферативной активности КС и их жизнеспособности (в культурах 34_5 и 37_5 на 15-е сут культивирования соответственно 28.5 и 24.6 % клеток, меченных BrdU,
находятся на пике пролиферативной активности, 92.7 и 92.7 % клеток жизнеспособны против 20.2 % BrdU+-клеток и 88.9 % живых клеток в культуре 34_21).
Культивирование при повышенной температуре незначительно увеличивает пролиферацию, но снижает жизнеспособность клеток (23.1 % BrdU+-клеток,
74.9 % живых клеток в культуре 37_21). В то же время культивирование при 37 °С в условиях как гипоксии, так и нормоксии способствует дедифференцировке КС:
через 15 сут 98.8 (37_5) и 98.6 (37_21) % клеток экспрес-сируют маркер недифференцированных КС цитокератин-18, а в культурах 34_5 и 34_21 1 только 26.5 и 6.6 %
клеток соответственно. Экспрессия транскрипционного фактора КС Wt1, необходимого для формирования межклеточных контактов и поддержания развития половых
клеток, исчезает на 3-и сут в большинстве клеток при всех условиях культивирования, но восстанавливается через 15 сут в КС, формирующих колонии только при 37 °С
(59.1, 29.5, 11.1 и 3.6 % Wt1+-клеток в культурах 37_21, 37_5, 34_21 и 34_5 соответственно). Экспрессия других маркеров КС - виментина, кластерина и
Gata-4 - неизменна при всех условиях ведения культуры. На основании полученных результатов мы предполагаем, что культивируемые КС могут оказаться полезными
как для репродуктивной биологии, так и для регенеративной медицины.
Ключевые слова: клетки Сертоли, гипоксия, тепловое воздействие, цитокератин-18, Wt1
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
