РАЗРАБОТКА НОВОЙ БЕСФИДЕРНОЙ СИСТЕМЫ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛУЧЕННЫХ В НЕЙ СУБЛИНИЙ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ
КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ПРИ АУТОГЕННОМ И АЛЛОГЕННОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ
А.М. Кольцова,1 И.В. Воронкина,1 О.Ф. Гордеева,2 В.В. Зенин,1 Н.В. Лифанцева,2
А.С. Мусорина,1 Л.В. Смагина,1 Т. К. Яковлева,1 Г. Г. Полянская 1,*
1 ФГБУН Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург и
2 Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва;
* электронный адрес: poljansk@mail.cytspb.rssi.ru
Создана бесфидерная система культивирования эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) человека с использованием субстрата, который составляют белки
внеклеточного матрикса (ВКМ), синтезированные фидерными клетками, представляющими собой мезенхимные стволовые клетки (SC5-MSC), полученные из
исходной линии ЭСК - SC5. В составе субстрата обнаружены белки ВКМ фибронектин и ламинин, способствующие росту ЭСК в бесфидерных системах.
Существенным компонентом этой системы является использование SC5-MSC кондиционированной среды. Получены 2 сублинии ЭСК человека: сублинию SC5-FF
культивировали в аутогенной, а сублинию SC7-FF – в аллогенной бесфидерной системе. Сублинии SC5-FF и SC7-FF прошли соответственно более 300 и 115 удвоений
клеточной популяции, сохранили нормальный диплоидный кариотип и способность дифференцироваться in vitro в производные трех зародышевых листков.
Гистохимический и иммунофлуоресцентный анализы показали, что эти сублинии экспрессируют маркеры недифференцированных ЭСК: щелочную фосфатазу, Oct-4,
SSEA-4, TRA-1-81, а также антиген транспортера множественной лекарственной устойчивости ABCG2. С помощью ПЦР-анализа показано, что недифференцированные
клетки линии SC5-FF, подобно исходной линии SC5, поддерживающейся в фидерной системе культивирования, экспрессируют гены OCT4, NANOG для соматических
клеток и DPPA3/STELLA, DAZL для линии половых клеток. В ходе дифференцировки эмбриоидных телец экспрессия генов OCT4, NANOG, DPPA3/STELLA и DAZL
постепенно снижалась, а возрастала экспрессия генов, специфических для ранних дифференцированных клеток: GATA4, AFP (внезародышевой и зародышевой энтодермы),
PAX6 (нейроэктодермы) и BRY (мезодермы). Сравнительный анализ ряда характеристик ЭСК (кариотипическая структура, среднее время удвоения клеточной популяции
и количество недифференцированных клеток в популяциях) не показал существенных различий между исходными линиями SC5, SC7 и полученными из них сублиниями
SC5-FF, SC7-FF. Это свидетельствует о том, что бесфидерные системы культивирования, которые гораздо стабильнее любых фидерных систем, не нарушают ключевые
характеристики ЭСК в течение длительного времени и могут быть рекомендованы для фундаментальных, биомедицинских и фармакологических исследований, проводимых
с использованием ЭСК человека.
Ключевые слова: бесфидерная система культивирования, эмбриональные стволовые клетки человека, экспрессия маркеров, дифференцировка, кариотип
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
|
