МОЛЕКУЛЯРНОЕ КАРИОТИПИРОВАНИЕ ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ
Насонова Е.С.
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург;
электронный адрес: nosema@mail.ru
Изучение кариотипов большинства грибов и протистов, хромосомы которых отличаются небольшим размером и слабой морфологической дифференциацией, вызывает
трудности при использовании микроскопических методов. Анализ хромосомных наборов у таких организмов стал возможен благодаря молекулярному кариотипированию,
которое базируется на фракционировании интактных хромосомных ДНК с помощью пульс-электрофореза. Для соотнесения полос, наблюдаемых в геле после электрофореза,
с индивидуальными хромосомами применяют специальные методы идентификации хромосом, в том числе денситометрический анализ интенсивности свечения полос;
Саузерн-гибридизацию с хромосомо- и теломероспецифичными зондами в совокупности со сравнительным кариотипированием нескольких штаммов изучаемого вида с
выраженным размерным полиморфизмом гомологичных хромосом; сравнение паттернов рестрикции хромосомных ДНК с помощью двухмерного пульс-электрофореза
(KARD 2-D PFGE); сравнение кариотипов у серий штаммов с межхромосомными транслокациями или другими модификациями кариотипа, приводящими к изменению
размера хромосом. Помимо определения числа и размера хромосом молекулярное кариотипирование позволяет оценить уровень плоидности и размер гаплоидного генома
у исследуемого организма, выявить хромосомные перестройки и связанный с ними хромосомный полиморфизм, характерный для многих одноклеточных эукариот. Анализ
хромосомного набора и его пластичности актуален для изучения внутри- и межвидовой изменчивости, для исследования эволюции хромосом у близких видов и разработки
моделей видообразования. Сравнение молекулярных кариотипов среди изолятов грибов и протистов имеет большое практическое значение для клинической диагностики и
сельскохозяйственной микробиологии. B обзоре обсуждены методы кариотипирования и возможности их применения для исследования хромосом грибов и протистов,
описаны особенности выделения интактной высокомолекулярной ДНК хромосом и фракционирования такой ДНК с помощью электрофореза в пульсирующем электрическом
поле, рассмотрены причины возникновения и способы преодоления трудностей при интерпретации электрофореграмм и описании молекулярного кариотипа, перечислены
задачи, для решения которых используют молекулярное кариотипирование, с учетом современных методических требований сформулировано определение понятия
"молекулярный кариотип".
Ключевые слова: молекулярный кариотип, электрофоретический кариотип, хромосомная ДНК, хромосома, хромосомный полиморфизм,
одноклеточные эукариоты, протисты, грибы
| Full text
| Back
| Contents
| Main |
