ПАРАМЕТРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ОЦЕНКУ ПОДВИЖНОСТИ БЕЛКОВ ЯДРЫШКА В ЖИВЫХ КЛЕТКАХ МЕТОДОМ FRAP НА ПРИМЕРЕ БЕЛКА
ФИБРИЛЛАРИНА
Барыгина В.В.1,2 Миронова А.А.1,3, Зацепина О.В.1
1 Государственное учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина
и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, 2 Биологический факультет и 3 Факультет биоинформатики и биоинженерии Московского
государственного университета им. М.В. Ломоносова;
электронный адрес: zatsepina_olga@mail.ru; v.barygina@mail.ru
Метод FRAP (fluorescence recovery after photobleaching) в сочетании с конфокальной лазерной сканирующей микроскопией является одним из основных
подходов к изучению свойств белков в живых клетках млекопитающих. Однако данные разных авторов о динамическом состоянии одного и того же белка даже
в клетках одного типа могут сильно различаться. Причины таких расхождений до сих пор специально не анализировались. В настоящей работе на примере белка
ядрышка фибрилларина, слитого с EGFP, изучено влияние площади облучаемой области (region of interest, ROI) и температурных условий проведения эксперимента
на основные динамические характеристики белка - долю мобильной фракции и время полу-восстановления флуоресценции (t1/2) после фотообесцвечивания.
Полученные результаты показали, что оба параметра заметно влияют на оценку подвижности фибрилларина-EGFP в клетках HeLa. Сделано заключение, что
при постановке экспериментов методом FRAP площадь ROI должна быть стандартизована и, по возможности, минимизирована. Кроме того, при анализе
динамических характеристик белков ядрышка, участвующих в температуро-зависимых энзиматических реакциях, необходимо придерживаться стандартных
температурных условий.
Ключевые слова: FRAP, фибрилларин, мобильная фракция белка, время полу-восстановления флуоресценции (t1/2), площадь
фотообесцвечивания ROI, температурные условия
| Статья
| Back
| Contents
| Main |
