МУЛЬТИПОТЕНТНЫЕ МЕЗЕНХИМНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ДЕСКВАМИРОВАННОГО ЭНДОМЕТРИЯ. ВЫДЕЛЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В КАЧЕСТВЕ
ФИДЕРНОГО СЛОЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ ЛИНИЙ ЧЕЛОВЕКА
В.И. Земелько,1 Т.М. Гринчук,1 А.П. Домнина,1 И.В. Арцыбашева,1 В.В. Зенин,1
А.А Кирсанов,3 Н.К. Бичевая,3 В.С. Корсак,3 Н.Н. Никольский 1,2
1 Институт цитологии РАН, С.-Петербург, 2 Факультет медицинской физики Санкт-Петербургского Государственного Политехнического Университета и
3 Международный Центр Репродуктивной Медицины, С.-Петербург;
1 электронный адрес: vzemelko@mail.ru
В настоящей работе были получены новые линии мезенхимных стволовых клеток (МСК) человека из десквамированного эндометрия менструальной крови.
Адгезивные к пластику МСК эндометрия (эМСК) представляют собой гетерогенную популяцию, состоящую в основном из стромальных клеток и эпителиальных клеток
эндометриальной железы. Полученные линии соответствуют критериям Международного общества клеточной терапии по определению мультипотентных МСК человека,
независимо от источника их происхождения. Линии эМСК имеют позитивную экспрессию таких маркеров как CD73, CD90 и CD105, а также CD13, CD29, и CD44. Отсутствие
экспрессии поверхностных маркеров CD19, CD34, CD45, CD117, CD130 и HLA-DR (класса II) характеризует клетки выделенных линий как имеющие мезенхимный стромальный,
а не гемопоэтический фенотип. Мультипотентность выделенных эМСК подтверждена их способностью дифференцироваться в другие типы клеток мезодермы, такие как остеобласты
и адипоциты. Кроме этого, клетки исследованных линий частично (более 50 %) экспрессируют маркер плюрипотентности SSEA-4, но не экпрессируют Oct-4. Методом
иммунофлуоресценции показана также экспрессия таких маркеров нейрональных предшественников, как нестин и бета-III-тубулин. Это ведет к гипотезе о предрасположенности
эМСК к дифференцировке в нейрональные и глиальные типы клеток. Полученные линии эМСК характеризуются высоким уровнем пролиферации (время удвоения составляет 22-23 ч)
и высокой эффективностью клонирования (около 60 %). В процессе культивирования in vitro клетки проходят более 45 удвоений популяции и сохраняют нормальный кариотип по
числу хромосом и их структуре. Показано, что обработанные митомицином эМСК являются перспективным фидерным слоем для линий эмбриональных стволовых клеток человека
(чЭСК) С612 и С910. ЭМСК, как фидерная культура, поддерживает чЭСК в плюрипотентном, недифференцированном состоянии, что выявляется экспрессией таких маркеров,
как Oct-4, щелочная фосфатаза и SSEA-4. При ко-культивировании чЭСК сохраняют свою морфологию, пролиферативную активность в течение более 40 пассажей и способность
к спонтанной дифференцировке в 3 зародышевых листка через образование цистических эмбриоидных телец. Неинвазивный и доступный метод выделения эМСК менструальной
крови, их мультипотентность, высокая пролиферативная активность in vitro, и стабильность кариотипа при длительном культивировании, делают данные стволовые клетки
ценным и привлекательным материалом для клеточной терапии. Использование полученных эМСК в качестве фидерной культуры исключает риски, связанные с использованием
клеток животного происхождения, что важно для будущих клинических применений чЭСК.
Ключевые слова: эндометриальные мезенхимные стволовые клетки человека, менструальная кровь, мультипотентность, дифференцировка, фидерная культура,
эмбриональные стволовые клетки человека
| Back
| Contents
| Main |
|
