МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ ЭПИТЕЛИАЛЬНОГО НАТРИЕВОГО КАНАЛА КОРТАКТИНОМ: ВОВЛЕЧЕНИЕ ДИНАМИНА
Д. В. Илатовская,1,2,* Т. С. Павлов,2 Ю. А Негуляев,1,3 А. В. Старущенко 2
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия,
2 Медицинский Колледж Висконсина, Милуоки, США и
3 Факультет медицинской физики и биоинженерии Санкт-Петербургского государственного политехнического университета;
* электронный адрес: daria.ilatowska@gmail.com
Нами недавно было показано, что актин-связывающий белок кортактин регулирует эпителиальные натриевые каналы (ENaC) и этот эффект опосредован через комплекс Arp2/3.
Кортактин может также запускать определенные сигнальные каскады через ГТФазу динамин, вовлеченную в клатрин-опосредованный эндоцитоз. В настоящем исследовании
изучали вовлечение динамина в регуляцию ENaC кортактином. Первоначально использовали недавно открытый ингибитор динамина дайносор. Однако применение этого ингибитора
оказалось мало приемлемым в связи с его побочными эффектами. Так, обработка клеточной линии mpkCCDc14 дайносором (в концентрации 10 и 100 мкМ) приводила к уменьшению
ENaC-опосредованного трансэпителиального тока. Кроме того, дайносор уменьшал амилорид-чувствительный Na+ ток в клетках CHO, трансфицированных
субъединицами ENaC. Таким образом, дайносор снижает активность как нативного, так и оверэкспрессированного канала и не пригоден для изучения ENaC. Этот эффект, по всей
видимости, происходит либо за счет токсичного действия ингибитора, либо вследствие ускорения эндоцитоза белков, активирующих ENaC. В последующих экспериментах для
определения роли динамина использовали плазмиды, кодирующие мутантные формы динамина и кортактина. Доминантно негативный динамин, трансфицированный совместно с
субъединицами ENaC, значительно повышал плотность амилорид-чувствительного тока по сравнению с током через мембрану клеток, трансфицированных только субъедиицами
ENaC (контроль); дополнительная экспрессия кортактина в этой системе приводила к возвращению плотности тока на контрольный уровень. Более того, оверэкспрессия субъединиц
ENaC с SH3 доменом кортактина, отвечающим за связывание с динамином, привела к уменьшению тока через ENaC. Таким образом, в данном исследовании мы показали, что в
регуляцию ENaC посредством кортактина вовлечены, помимо комплекса Arp2/3, динамин и связанные с ним процессы.
Ключевые слова: ENaC, кортактин, динамин, эндоцитоз, дайносор, транспорт натрия, эпителиальные клетки
| Back
| Contents
| Main |
|
