Проведено сравнение семи методов получения цельного коллагена с телопептидами для применения в клеточном культивировании и тканевой инженерии.
Коллаген получали из предварительно обезволошенной телячьей шкуры с применением протеазы из Bacillus licheniformis. Из измельченной дермы вначале
извлекали различными растворами неколлагеновые белки и протеогликаны, а затем экстрагировали коллаген кислыми растворителями. Следили за динамикой
извлечения неколлагеновых белков и кислых протеогликанов, анализируя промывные экстракты на белки и гексуроновые кислоты. Контролировали гелеобразующую
способность полученных коллагенов. Чистоту продукта проверяли по результатам электрофореза в полиакриламидном геле и по действию на смешанную культуру
фибробластов и карди-омиоцитов новорожденных крыс. Ни один из полученных коллагенов не оказался цитотоксичным, но наилучшим по выходу продукта и
действию его на клетки оказался способ получения, в котором предварительную отмывку производили 0.02 М Na2PO4, а экстракцию
коллагена - 0.5 М уксусной кислотой с добавкой 5 мM ЭДТА. Таким образом, разработан оптимальный метод получения из телячьей шкуры цельного коллагена для
применения в клеточном культивировании и тканевой инженерии. На основании разработанной рецептуры авторами получен патент РФ.
Ключевые слова: тканевая инженерия, коллаген, получение коллагена, фибриллярная структура коллагена, клетки в коллагеновых гелях
| Pdf |
Back |
Contents |
Main |
