ЧАСТИЧНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА КРЫСЫ, ВЫДЕЛЕННОГО ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖИВОТНЫХ,
ПОЛУЧАВШИХ С ПИЩЕЙ СОЛИ СЕРЕБРА
А. Н. Скворцов,1, 2 Е. Ю. Ильичева,2 Е. А. Затуловский,2 А. Н. Савельев,1
Н. В. Цымбаленко,3 М. М. Шавловский,3 Л. В. Пучкова 2, 3
1 Институт цитологии РАН,
2 С.-Петербургский государственный политехнический университет и
3 Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург;
1 электронный адрес: skvor@mail.cytspb.rssi.ru,
colbug@mail.ru
Абиогенные ионы Ag(I) благодаря сходству электронной структуры с ионами меди (I) способны конкурировать с Cu(I) за связывание с белками, транспортирующими медь из
внеклеточного пространства к местам формирования купроэнзимов в клетке. У животных, получающих с кормом соли серебра, развивается дефицит внеклеточной меди,
ассоциированной с церулоплазмином (ЦП), основным медьпереносящим белком сыворотки крови позвоночных. В работе представлены результаты изучения биохимических и
физико-химических свойств ЦП сыворотки крови крыс, в течение 4 нед получавших с пищей AgCl (Ag-крысы). Методом ионообменной хроматографии из сыворотки крови Ag-крыс
получен набор фракций ЦП (Ag-ЦП), элюированных ступенчатым градиентом NaCl. Для каждой фракции методами прямого определения ферментативной активности в геле оценена
оксидазная и ферроксидазная активность и измерена кинетическим методом каталитическая активность в реакции окисления специфического хромогенного субстрата для холо-ЦП.
Молекулярная масса, относительная электрофоретическая подвижность и соотношение апо- и холо-форм Ag-ЦП установлены методом иммуноблотинга. Продемонстрировано, что
препараты Ag-ЦП не содержат продуктов спонтанной ограниченной протеолитиче-ской деградации, характерных для препаратов холо-ЦП. Фракции Ag-ЦП сопоставлены по
оптическим спектральным свойствам, третичной структуре, устойчивости к тепловой денатурации, а также содержанию ионов меди и серебра с холо-ЦП сыворотки крови интактных
крыс. Показано, что препарат Ag-ЦП содержит примерно 1-2 % ЦП, ферментативные и спектральные характеристики которого совпадают с холо-ЦП. В препарате Ag-ЦП соотношение
[Ag] : [Cu] соответствует примерно 4 : 1. По данным кругового дихроизма и дифференциальной сканирующей калориметрии, третичная структура большинства молекул в Ag-ЦП
нарушена, что, возможно, повышает их устойчивость к спонтанной ограниченной протеолитической деградации.
Ключевые слова: метаболизм меди, церулоплазмин, транспорт Cu(I)/Ag(I), Ag-церулоплазмин, ионообменная хроматография, круговой дихроизм,
сканирующая калориметрия
| Pdf |
Back |
Contents |
Main |
|
