2010, Том 52, № 10, c. 875–882

ПОЛУЧЕНИЕ ДОФАМИНОВЫХ НЕЙРОНОВ ИЗ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА IN VITRO И. В. Кожухарова,1 И. И. Фридлянская, В. И. Земелько, З. В. Ковалева, Н. А. Пуговкина, Л. Л. Алексеенко, М. В. Харченко, Н. Д. Аксенов, А. Н. Шатрова, Т. М. Гринчук, С. В. Анисимов, Н. Н. Никольский Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург; 1 электронный адрес: kojuxarova@mail.ru Задача исследования заключалась в направленной дифференцировке эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) человека в дофаминовые (дофаминергические - ДА) нейроны в культуре in vitro. Показано, что дифференцировка ЭСК человека в ДА-нейроны in vitro может быть осуществлена без использования совместного культивирования со стромальными клетками. Терминальная дифференцировка ЭСК в ДА-нейроны достигалась в течение 3-4 нед с помощью последовательного применения ростового фактора ноггина и основного фактора роста фибробластов (bFGF) на субстрате из коллагена и матриге-ля. Эффективность дифференцировки оценивали по числу колоний, содержащих нейроны, экспрессирующие фермент тирозингидроксилазу (ТН) по числу ТН-позитивных клеток в суспензии с помощью проточной цитофлуориметрии. ТН является маркером зрелых ДА-нейронов. Отсутствие плюрипотентных клеток в популяции на заключительном этапе направленной дифференцировки указывает на то, что полученные с использованием данного протокола ДА-нейроны могут быть использованы для трансплантации животным, моделирующим нейродегенеративное заболевание Паркинсона, без риска образования тератом. Ключевые слова:  эмбриональные стволовые клетки человека, нейрональная дифференцировка, дофаминергические нейроны, иммуноцитохимия, проточная цитофлуориметрия | Pdf | Back | Contents | Main |