| 2010, Том 52, № 1, c. 80-93 |
В лизатах штаммов дрожжей, несущих мутацию в гене ADE1 или ADE2 и накапливающих красный пигмент в результате полимеризации аминоимидазолриботида (промежуточного вещества в биосинтезе аденина), изучали флуоресценцию тиофлавина Т, связанного с амилоидизированными белками. Было показано, что на среде, содержащей 10-кратный избыток аденина, который подавляет синтез пуринов de novo и тем самым блокирует образование красного пигмента, флуоресценция тиофлавина, связанного с амилоидом, увеличивается в несколько раз. К тому же эффекту приводит возникновение мутаций, блокирующих первые этапы биосинтеза пуринов и таким образом подавляющих синтез красного пигмента. Генерация мутаций в генах ADE1 или ADE2 в исходно белых прототрофных по аденину штаммах дрожжей приводит к значительному падению флуоресценции. Изучение фракции белковых полимеров посредством электрофореза в агарозном геле позволило предположить, что изменения флуоресценции действительно связаны с понижением количества амилоида в клетках, накапливающих красный пигмент. Опыты на модельных фибриллах инсулина свидетельствуют в пользу того, что красный пигмент взаимодействует с готовыми фибриллами, препятствуя их связыванию с тиофлавином Т. Сравнение осадочных белков, выделенных из красных и белых изогенных штаммов в 2В-электрофорезе с последующим масс-спектроскопическим анализом, позволило идентифицировать 23 пигментзависимых белка. Среди них преобладают шапероны и белки, участвующие в метаболизме глюкозы, что делает их близкими по составу к прионассоциированным белкам, выявленным нами ранее. Предполагается, что красный пигмент, связываясь с амилоидными фибриллами, препятствует образованию прионовых агрегатов, а нарушение связи фибрилл с шаперонами приводит к подавлению размножения прионов. Ключевые слова: амилоид, прионы, тиофлавин Т, красный пигмент, Saccharomyces cerevisiae |