МЕТОД АНАЛИЗА БЕЛКОВ ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА, СИНТЕЗИРУЕМОГО КЛЕТКАМИ В КУЛЬТУРЕ
Л. В. Туроверова,1,* М. Г. Хотин,1 Н. М. Юдинцева,1 К.-Э. Магнуссон,2 М. И. Блинова,1
Г. П. Пинаев,1 Д. Г. Тентлер 1,*
1 Институт цитологии РАН, 2 Отдел клинической и экспериментальной медицины Линчепингского университета, Швеция;
* электронный адрес: lvtur@mail.ru;
dtentler@mail.ru
Внеклеточный матрикс (ВКМ) представляет собой высокоорганизованную мультимолекулярную структуру, необходимую для жизнедеятельности любых
организмов. Хотя в настоящее время довольно много известно о структурных компонентах ВКМ, получение всего комплекса этих белков является достаточно
сложным процессом, поскольку в состав ВКМ входят фибриллярные белки и протеогликаны, которые образуют сложные мультимолекулярные сети. В настоящей
работе мы постарались подобрать наиболее щадящие условия для снятия клеток в культуре без повреждения клеточной мембраны с последующей экстракцией
белков ВКМ. В исследовании были использованы клетки эпидермоидной карциномы человека линии А431 и фибробласты, полученные из нормальной и рубцовой
кожи человека. Показано, что снятие клеток с поверхности культуральных чашек раствором ЭДТА не повреждает их мембран. Последующая обработка оставшихся
на поверхности культуральных чашек матриксных белков уксусной кислотой для перевода коллагена из фибриллярной формы в молекулярную значительно
улучшает возможность фракционирования белков ВКМ. Для снятия белков нами использовался буфер, разработанный на основе буфера для проб по методу
Laemmli. С помощью разработанного метода были получены препараты белков ВКМ, синтезируемые клетками в культуре, пригодные для анализа одно- и
двумерным электрофорезом, а также для идентификации отдельных белков методами масс-спектрометрии. Эти исследования позволят сравнить белковый состав
ВКМ, полученного из разных источников, и понять, как может влиять отсутствие или наличие того или иного белка на структуру и свойства матрикса исследуемых
клеток.
Ключевые слова: внеклеточный матрикс, фибробласты, коллагены, фибронектин
| Pdf |
Back |
Contents |
Main |
|
