ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ В КЛЕТКАХ K562 ПОСЛЕ ЭКСТРАКЦИИ ХОЛЕСТЕРИНА
А. В. Сударикова,1 В. И. Чубинский-Надеждин, Ю. А. Негуляев, Е. А. Морачевская
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург;
1 электронный адрес: nastya@mail.cytspb.rssi.ru
Ранее показано, что активность потенциалнезависимых натриевых каналов в клетках лейкемии человека K562 зависит от состояния актинового цитоскелета.
Согласно современным представлениям о латеральной гетерогенности клеточных мембран, богатые холестерином липидные микродомены (рафты) имеют важное
значение для связи кортикального актина и интегральных мембранных белков, в том числе ионных каналов. В настоящей работе функциональные свойства
натриевых каналов в клетках K562 исследовали при снижении содержания мембранного холестерина, т. е. в условиях деструкции рафтов. Для частичной
экстракции холестерина клетки инкубировали с метил-бета-циклодекстрином (МбЦД), олигосахаридом, избирательно связывающим стеролы. С помощью метода
патч-кламп регистрировали токи через натриевые каналы в участке мембраны нативной клетки и в изолированном мембранном фрагменте, обращенном
цитоплазматической поверхностью в омывающий раствор. После инкубации с МбЦД (2.5 или 5.0 мМ) наблюдали активацию натриевых каналов при действии
цитохалазина Б или Д как в целых клетках, так и в мембранных фрагментах. Биофизические характеристики натриевых каналов в клетках K562 с пониженным
содержанием холестерина были близки к таковым в контроле, проводимость составляла 12 пСм. В опытах с глобулярным актином показано, что сборка
филаментов на цитоплазматической стороне мембраны приводит к инактивации натриевых каналов в модифицированных клетках. Судя по имеющимся данным,
натриевые каналы в клетках K562 не ассоциированы с богатыми холестерином мембранными микродоменами. Обсуждаются возможные механизмы взаимосвязи
мембраны и цитоскелета.
Ключевые слова: плазматическая мембрана, натриевые каналы, цитоскелет, актин, холестерин, клетки лейкемии человека, цитохалазин,
метил-бета-циклодекстрин
| Pdf |
Back |
Contents |
Main |
