ХАРАКТЕРИСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НОВЫХ ЛИНИЙ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА
Т. А. Крылова,1 А. М. Кольцова,1 В. В. Зенин,1 О. Ф. Гордеева,2
А. С. Мусорина,1 Т. С. Горячая,1 С. А. Шлыкова,3 Ю. К. Каменецкая,3
Г. П. Пинаев,1 Г. Г. Полянская 1, *
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, 2 Институт биологии развития им. Н. К. Кольцова и
3 ООО АВА-ПЕТЕР;
* электронный адрес: poljansk@mail.cytspb.rssi.ru
Описаны 4 постоянные линии эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) человека (SC1, SC2, SC3 и SC4), выделенных из предимплантационных
бластоцист, полученных при искусственном оплодотворении. Клеточные линии культивировали на митотически инактивированных фидерных клетках
человека. Линии SC1 и SC2 прошли более 150 удвоений клеточной популяции, а линии SC3 и SC4 - около 120, что значительно превысило лимит Хейфлика.
Все линии сохраняют высокую активность щелочной фосфатазы, экспрессию транскрипционного фактора OCT-4 и экспрессию поверхностных антигенов
(SSEA-4, TRA-1-60 и TRA-1-81), подтверждающие статус ЭСК и их принадлежность человеку. Результаты иммунофлуоресцентного анализа экспрессии
антигенов, характеризующих эктодерму, эндодерму и мезодерму, подтвердили наличие плюрипотентности в условиях in vitro во всех 4 линиях. С
помощью ПЦР-анализа выявлена экспрессия шести генов, специфических для плюрипотентных клеток (OCT-4, NANOG, DPPA3/STELLA,
TDGF/CRIPTO и LEFTYA). Обнаружена корреляция между уровнем пролиферативной активности и характером окраски флуоресцентными
красителями, связывающимися с ДНК. Красители Хехст 33342 и иодистый пропидий диффузно окрашивают ядра в медленно пролиферирую-щих клетках
линий SC1 и SC2. Напротив, в активно пролиферирующих клетках линий SC3 и SC4 ядра окрашиваются четко. При изменении условий культивирования
линий SC3 и SC4 у них снижался уровень пролиферативной активности и по характеру окрашивания они становились подобными клеткам SC1 и SC2.
Установлено, что качество флуоресцентной окраски Хехстом 33342 и иодистым пропидием является показателем уровня пролиферации. Обсуждаются
возможные причины и механизмы данной особенности ЭСК человека.
Ключевые слова: постоянные линии эмбриональных стволовых клеток человека, иммунофлуоресцентный анализ, экспрессия генов,
антитела, флуоресцентные красители
| Pdf |
Back |
Contents |
Main |
|
