УБИКВИТИНИРОВАНИЕ РЕЦЕПТОРОВ ЭФР С ДЕЛЕЦИЯМИ И ТОЧЕЧНЫМИ МУТАЦИЯМИ C-ТЕРМИНАЛЬНОГО ДОМЕНА В ХОДЕ ЭНДОЦИТОЗА
К. А. Кондратов,1 М. С. Меликова,1 А. Л. Чернорудский, 1, 2 Е. С. Корнилова 1, 3
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, и 2 Нижегородская государственная медицинская академия;
3 электронный адрес: elena.kornilova@gmail.com
Проведен анализ убиквитинирования рецепторов ЭФР, несущих различные мутации C-терминаль-ного домена. Эти мутанты различаются как по набору
мажорных сайтов автофосфорилирования, определяющих способ связывания с убиквитин-лигазой c-Cbl, так и по наличию остатков лизина, служащего
потенциальным акцептором убиквитина. Обнаружено, что рецептор, лишенный тирозинкиназной активности в результате замены лизина на фенилаланин в
АТФ-связывающем сайте тирозинкиназного (ТК) домена (K721), практически не убиквитинируется, так же как и рецептор, лишенный всех сайтов
связывания с c-Cbl в результате делеции 165 C-терминальных аминокислотных остатков (CD165). В то же время динамика и характер убиквитинирования
других делеционных мутантов значительно различаются. Так, способный связывать c-Cbl напрямую, но лишенный сайтов связывания Grb2 рецептор (CD123)
убиквитинировался в наименьшей степени и лишь на ранних сроках после стимуляции эндоцитоза ЭФР. Рецептор, обладающий всеми сайтами связывания
как для c-Cbl, так и для Grb2, но лишенный домена из 63 аминокислотных остатков на С-конце рецептора ЭФР (CD63), содержащего два сайта
фосфорилирования (Y1148 и Y1173) и 4 остатка лизина, убиквитинировался слабее и содержал больше низкоубиквитинированных форм, чем рецептор
дикого типа. Однако эти остатки лизина не являются акцепторными сайтами для убиквитина, поскольку полноразмерный мутант, лишенный, как и CD63,
мажорных сайтов автофосфорилирования Y1148 и Y1173, убиквитинируется так же, как и делеционный мутант. Таким образом, С-концевая область
рецептора ЭФР, не являясь субстратом убиквитинирования, вовлечена в регуляцию этого процесса. Обнаружено также, что паттерн убиквитинирования
рецептора различается при быстром и медленном эндоцитозе. В первом случае количество рецептора ЭФР быстро уменьшалось в результате эффективной
деградации. При этом уровень c-Cbl, ассоциированного с рецептором, оставался практически неизменным, тогда как количество общего внутриклеточного
c-Cbl значительно падало. Обработка клеток ингибитором протеасом MG132 лишь частично блокировала убыль c-Cbl. Во втором случае общее количество
как рецептора, так и c-Cbl практически не изменялось, что свидетельствует о преобладании пути рециклирования таких рецепторов, даже несмотря на их
убиквитинирование.
Ключевые слова: рецептор ЭФР, сайты автофосфорилирования, С-терминальный домен, убиквитинирование, убиквитин-лигаза c-Cbl,
эндоцитоз
| Pdf |
Back |
Contents |
Main |
