ЭКСПРЕСС-МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕАЗЫ ЕСР32 - УНИКАЛЬНОГО ИНСТРУМЕНТА В ИЗУЧЕНИИ АКТИНА
А. В. Морозова,1 С. Ю. Хайтлина, А. Ю. Малинин
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург;
1 электронный адрес: avmoro@gmail.com
Протеаза ЕСР32 необходима в исследованиях актина, основного белка мышц и цитоскелета. Источником фермента является природный штамм
энтеробактерий, в минорных количествах накапливающий протеазу внутри клетки в постэкспоненциальной фазе роста. Биосинтез лимитируется количеством
кислорода, поступающего в среду. Предложен высокоэффективный метод двухфазного культивирования продуцента с повышенным уровнем аэрирования
в экспоненциальной фазе роста. Исследованы свойства фермента и показано, что возможности использования аффинного или иного одностадийного
способа выделения ограничены. Разработан простой в воспроизведении метод получения и хранения препарата ЕСР32 со степенью чистоты и уровнем
активности, отвечающими высоким требованиям структурно-функциональных исследований актина.
Ключевые слова: актин, протеаза ЕСР32, ограниченный протеолиз, постлогарифмический синтез, внутриклеточные ферменты бактерий,
очистка белков
Back
Contents
Main
