ПРИМЕНЕНИЕ РЕАКТИВОВ ТИПА ШИФФА С РАЗЛИЧНЫМИ СПЕКТРАЛЬНЫМИ ХАРАКТЕРИСТИКАМИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ
ЛЕГКОДОСТУПНОЙ И ТРУДНОДОСТУПНОЙ ФРАКЦИЙ ГЛИКОГЕНА В ОТДЕЛЬНЫХ ГЕПАТОЦИТАХ
Н. Н. Безбородкина, Е. И. Киршина, Е. В. Мушинская, Б. Н. Кудрявцев
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург;
электронный адрес: cellpath@mail.cytspb.rssi.ru
Исследована динамика накопления суммарного гликогена, его легкодоступной (ЛД) и труднодоступной (ТД) фракций в гепатоцитах после введения 30%-ного
раствора глюкозы крысам, голодавшим в течение 48 ч. В работе применен оригинальный метод выявления и количественного определения ЛД- и ТД-фракций
гликогена в отдельных гепатоцитах, основанный на использовании реактивов типа Шиффа с различными спектральными характеристиками -
аурамина-SO2 (Au-SO2 ) и бромистого этидия-SO2 (EtBr-SO2 ). Окраска препаратов в течение 40 мин
Au-SO2 выявляла ЛД-фракцию (зеленая флуоресценция, λmax = 526 нм), а последующая окраска тех же препаратов
EtBr-SO2 в течение 50 мин - ТД-фракцию гликогена (красная флуоресценция, λmax = 620 нм) в клетках. Измерение интенсивности
флуоресценции в соответствующих спектральных областях позволило определить количество той и другой фракций гликогена в отдельных клетках печени.
Показано, что по мере накопления гликогена содержание ЛД-фракции в гепатоцитах нарастает. Коэффициент корреляции (r) между содержанием
ЛД-фракции и содержанием суммарного гликогена для гепатоцитов, полученных из печени голодных крыс, составлял 0.95, а для гепатоцитов, изолированных
через 20 и 30 мин после начала рефидинга крыс глюкозой - 0.95 и 0.98 соответственно. Через 90 и 120 мин после введения глюкозы крысам, когда популяция
гепатоцитов становится асинхронной в отношении синтеза и деградации гликогена в клетках, зависимость содержания ЛД-фракции от количества суммарного
гликогена становится менее выраженной (r = 0.71 и 0.82 соответственно). Таким образом, применение реактивов Шиффа с различными спектральными
характеристиками может дать ценную информацию о структуре гликогена в клетках и порядке его синтеза и деградации в клеточной популяции.
Ключевые слова: фракции гликогена, гепатоциты, аурамин 00, бромистый этидий, реактивы типа Шиффа
| Pdf |
Back |
Contents |
Main |
