ИССЛЕДОВАНИЕ NO-СИНТАЗНОЙ АКТИВНОСТИ И ОБНАРУЖЕНИЕ NO-ЗАВИСИМОГО АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ЭФФЕКТА
В ПЕРВИЧНОЙ КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК ЭПИТЕЛИЯ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ ЛЯГУШКИ
Е. М. Фок, В. Т. Бахтеева, Е. А. Лаврова, С. Д. Николаева, Р. Г. Парнова 1
Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, Санкт-Петербург;
1 электронный адрес: parnova@iephb.ru
Ранее нами было показано, что в мочевом пузыре лягушки эндогенный оксид азота (NO) модулирует действие аргинин-вазотоцина в увеличении
осмотической проницаемости эпителия. Задача данной работы заключалась в получении первичной культуры эпителиальных клеток мочевого пузыря
лягушки с целью исследования механизмов регуляции NO-синтазы (NOS) и оценки ее активности в условиях in vitro. Наилучшим условием для
культивирования клеток оказалось использование модифицированной среды L-15, содержащей 10 % эмбриональной бычьей сыворотки и 40 мкг/мл
гентамицина, при комнатной температуре; в этих условиях в течение 8 сут 50 % клеток сохраняли свою жизнеспособность. Активность NOS оценивали по
накоплению нитрит-ионов (NO2-) в культуральной жидкости, количество NO2- в присутствии 5 мМ
L-NAME, ингибитора всех типов NOS, считали неспецифическим. Накопление NO2- было линейным во времени в течение
3 сут инкубации и тормозилось в присутствии вещества 1400W, ингибитора индуцибельной NOS (iNOS), или 7-нитроиндазола, ингибитора конститутивных
NOS, в концентрациях 5-50 и 10-200 мкМ соответственно. В присутствии низких доз гентамицина (1-2 мкг/мл) через 1 сут культивирования клеток резко
возрастало количество бактерий в культуральной среде, индентифицированных как Esherichia coli и Acinetobacter sp. Добавление в
культуральную среду 5 мМ L-NAME приводило к увеличению количества бактерий в 1.5 и 2.5 раза при концентрациях гентамицина 2 и 1 мкг/мл
соответственно. Таким образом, клетки эпителия мочевого пузыря лягушки обладают NO-зависимым антибактериальным эффектом, обеспечиваемым,
по-видимому, усилением экспрессии iNOS. Полученные данные свидетельствуют о том, что первичная культура клеток эпителия мочевого пузыря лягушки
является перспективной моделью для исследования роли NO и регуляции активности NOS, представляя особый интерес для изучения защитных эффектов
NO в эпителиальных клетках.
Ключевые слова: оксид азота, NO-синтаза, первичная культура клеток, эпителий мочевого пузыря лягушки, антибактериальный эффект
Back
Contents
Main
