СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ АМИЛОИДА И ПРИОНОВ В КЛЕТКАХ ДРОЖЖЕЙ
В. Невзглядова,1 И. М. Кузнецова, А. В. Артемов, Е. В. Михайлова, К. К. Туроверов,
Т. Р. Сойдла
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург;
1 электронный адрес: oneva@mail.cytspb.rssi.ru
Предпринята попытка количественной оценки содержания амилоида при помощи обработки грубых
лизатов дрожжевых клеток тиофлавином T — агентом, специфически окрашивающим амилоидные фибриллы.
Мы показали, что обработка хлоридом гуанидина (GuHCl) и сверхпродукция шаперона Hsp104p,
приводящие к элиминации фактора [PSI+], сопровождаются стабильным снижением содержания амилоида,
о чем говорит понижение интенсивности флуоресценции (IF) тиофлавина T. В то же время сверхэкспрессия
гена SUP35, кодирующего белок, прионизируемая форма которого служит фактором [PSI+],
приводит к образованию [PSI+]-клонов с повышенной IF тиофлавина T. Передача [PSI+]-фактора цитодукцией
в скрещиваниях, в которых реципиент проявляет низкую IF, сопровождается также устойчивым
повышением IF у цитодуктантов, что свидетельствует об увеличении содержания амилоида. Таким
образом, в модельных опытах, в которых теми или иными воздействиями модифицируется количество
одного из дрожжевых прионовых амилоидов, фактора [PSI+], изменение IF тиофлавина T
соответствует ожидаемому сдвигу содержания амилоида, причем сдвиг IF ведет себя как цитоплазматический
наследственный детерминант. Делается вывод, что IF тиофлавина T позволяет дать количественную
оценку содержания амилоида в клетке, а митотически стабильный сдвиг IF при воздействии ряда
агентов, влияющих на прионовый состав, позволяет дать количественную оценку вклада прионов в амилоидный
пул. Это дает основание полагать, что подобная оценка сдвигов IF тиофлавина T при воздействии
агентов, влияющих на прионовый состав, может оказаться полезной для обнаружения ранее неизвестных
прионов в штаммах дрожжей.
Ключевые слова: прионы, амилоид, цитодукция, Saccharomyces cerevisiae
Back
Contents
Main
|
