ЭКСПРЕССИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АКТИНА 5С ИЗ ДРОЗОФИЛЫ В МЕТИЛОТРОФНЫХ ДРОЖЖАХ PICHIA PASTORIS
О. В. Невзглядова,1 А. В. Артемов,1 В. В. Зенин,1 В. В. Верхуша,2
М. М. Шавловский,3 О. И. Поварова,1 Олеся В. Степаненко,1 И. М. Кузнецова,1
К. К. Туроверов 1
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, 2 Центр молекулярной медицины,
Московский государственный университет и 3 Институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург;
электронный адрес: kkt@mail.cytspb.rssi.ru
Разработана система экспрессии чужеродного гена актина в клетках дрожжей Pichia pastoris. В качестве целевого
белка использовали цитоплазматический актин 5С дрозофилы, на 90 % гомологичный β-актину высших эукариот. Для
отработки условий биосинтеза целевого белка в дрожжевых клетках и методики очистки рекомбинантного актина в настоящей
работе экспрессирован и очищен белок слияния GFP-актин, содержащий в качестве репортерной части зеленый флуоресцентный
белок GFP. Охарактеризованы размеры и выживаемость клеток P. pastoris, продуцирующих рекомбинантный белок. Показано,
что размер и форма клеток могут зависеть от накопления в них рекомбинантного актина. Очищенный белок слияния был
использован при получении поликлональных антител, необходимых для тестирования рекомбинантного актина.
Ключевые слова: рекомбинантный актин, зеленый флуоресцентный белок, белок слияния GFP-актин,
Pichia pastoris, актиновый цитоскелет
Back
Contents
Main
|
