ДЕЙСТВИЕ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ ИЗ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ НА ОПУХОЛЕВЫЕ И НОРМАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ В КУЛЬТУРЕЫ
О. В. Шамова,1, * Г. А. Сакута,2 Д. С. Орлов,1
В. В. Зенин,2 Г. И. Штейн,2 Н. И. Колодкин,2 И. В. Афонина,3
В. Н. Кокряков 1
1 ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, 2 Институт цитологии РАН и
3 ГНЦ ГосНИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург;
* электронный адрес: oshamova@yandex.ru
Изучали действие эффекторных молекул системы врожденного иммунитета — катионных антимикробных
пептидов (АМП) из нейтрофильных гранулоцитов (протегрина 1 свиньи и бактенецина 5 козы)
— на опухолевые и нормальные клетки млекопитающих in vitro. Сравнивали цитотоксическую активность
различных по структуре протегрина 1 (ПГ1) и бактенецина 5 (Бак5) в отношении ряда клеточных
линий, а также особенности их действия на эти клетки. Изучали, в частности, способность пептидов
проникать через клеточную мембрану в цитоплазму клеток-мишеней. Показано, что ПГ1, имеющий
структуру бета-шпильки, обладает быстрым и выраженным цитотоксическим действием в отношении
большинства исследованных клеточных линий, причем это действие проявляется более заметно в бессывороточной
среде и снижается в среде, содержащей 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, но не отменяется
полностью. Рассмотрено влияние серпинов (α1-антитрипсина) на цитотоксическую активность
ПГ1. Установлено, что в присутствии α1-антитрипсина цитотоксическая активность ПГ1 снижается, в
свою очередь антипротеазная активность α1-антитрипсина угнетается в присутствии ПГ1. Показано, что
Бак5 (линейный пептид), имеющий высокое содержание пролина в составе молекулы, проявляет значительно
более низкую, чем в ПГ1, токсическую активность в отношении исследованных клеточных линий.
Получены ПГ1 и Бак5, конъюгированные с флуоресцентным красителем (BODIPY F1), с помощью
конфокальной микроскопии показано, что оба меченых пептида способны проникать через мембраны в
цитоплазму клеток в течение 15—30 мин после добавления пептидов к клеточным суспензиям. С помощью
проточной цитометрии показано, что проникновение пептидов в клетки-мишени зависит от температуры
инкубационной среды и уровня энергетического метаболизма клеток. При блокировании синтеза
АТФ или понижении температуры (до 4 °С) процесс транслокации обоих пептидов через клеточные
мембраны угнетается. Присутствие веществ, угнетающих эндоцитоз (винбластина, цитохалазина B
и метилциклодекcтрина), тоже снижает эффективность включения ПГ1-BODIPY и Бак5-BODIPY в клетки,
но не отменяет полностью этот процесс. Полученные данные дают возможность предположить, что
оба пептида проникают в клетки как при участии процесса эндоцитоза, так и независимо от него. Способность
пептидов проникать во внутриклеточное пространство свидетельствует в пользу предположения
о том, что АМП могут участвовать в процессах, происходящих в цитоплазме эукариотических клеток
— как опухолевых, так и нормальных, в том числе в модуляции активности внутриклеточных серпинов.
Ключевые слова: бантимикробные пептиды, бактенецин 5, протегрин 1, врожденный иммунитет,
цитотоксическая активность, серпины
Back
Contents
Main
|
