КАЛЫЩИЗАВИСИМАЯ МОДУЛЯЦИЯ ГЛИЦИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ ЧЕЛОВЕКА, ЭКСПРЕССИРОВАННЫХ В КУЛЬТИВИРУЕМЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ
С. Булдакова,1 Е. Реаль,2 И. Жакоб,2 П. Брежестовский 1
1 Средиземноморский институт нейробиологии, Марсель, и
2 Институт им. Пастера, Париж, Франция;
1 электронный адрес: pbreges@inmed.univ-mrs.fr
Работа является начальным этапом проверки гипотезы, согласно которой регуляция глициновых рецепторов
осуществляется через неизвестный Са-связывающий белок (Fucile et al., 2000). Проведенный скрининг кДНК библиотеки
мозга человека выявил Са-связывающий белок (СаБ), который может быть кандидатом на роль функционального регулятора
работы глициновых рецепторов (ГлиР). В настоящей работе мы анализировали влияние укороченной формы этого белка
(СаБ-1) на ионные токи, вызываемые быстрой аппликацией глицина к поверхности клеток НЕК-293 и СНО, экспрессирующих
либо глициновый рецептор человека (ГлиР-1), либо ГлиР-1 и СаБ-1. Для количественной оценки влияния СаБ-1 на
чувствительность ГлиР-1 к глицину определяли концентрацию, вызывающую 50%-ный ответ (ЕД50). Через 40-72 ч после
трансфекции клеток кДНК были обнаружены достоверные (Р < 0.01, ANOVA-тест) различия в ЕД50 контрольных
НЕК-293 (экспрессирующих только ГлиР-1) и клеток, коэкспрессирующих ГлиР-1 и СаБ-1. Значение ЕД50 в контроле
составляло в среднем 68 ± 49 мкМ (n = 29). Средний коэффициент Хилла (nH) составлял 3.3 ± 1.3.
Для клеток, экспрессирующих ГлиР-1 и СаБ-1, значение ЕД50 составляло в среднем 409 ± 421 мкМ (n = 60), а
коэффициент nH был равен 2.9 ± 1.2. Для контрольных клеток СНО средние значения ЕД50 и коэффициент
nH составляли соответственно 54 ± 43 мкМ (п = 25) и 2.9 ± 1.3. Для клеток, экспрессирующих ГлиР-1 и СаБ-1,
средние значения ЕД50 и nH были равны соответственно 123 ± 104 мкМ (n = 28) и 2.4 ± 1.2.
Таким образом, наличие в клетках СаБ-1 приводит к достоверному снижению чувствительности ГлиР-1 к агонисту.
Результаты позволяют предположить, что СаБ-1 модулирует работу ГлиР, взаимодействуя с их цитоплазматическим
доменом.
Ключевые слова: глициновый рецептор, внутриклеточный кальций, кальцийсвязывающий белок, клетки линий
НЕК-293 и СНО, ионные токи
Back
Contents
Main
|
