ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР ZF5 РЕГУЛИРУЕТ В КЛЕТКАХ ГЕПАТОМЫ HepG2 ЧЕЛОВЕКА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА, СОДЕРЖАЩЕГО В
5'-РЕГУЛЯТОРНОМ РАЙОНЕ GCC-ТРИПЛЕТНЫЕ ПОВТОРЫ
С. В. Орлов,1, 2 К. Б. Кутейкин-Тепляков,3 А. В. Гришин,2
Э. Б. Диже,1 Е. Б. Прохорчук,4 А. П. Перевозчиков 2, *
1 Научно-исследовательский институт экспериментальный медицины РАМН, Санкт-Петербург,
2 Кафедра эмбриологии С.-Петербургского государственного университета,
3 Отдел нейробиохимии Университета Рура, Бохум, Германия, и
4 Институт биологии гена РАН, Москва;
* электронный адрес: app@iem.sp.ru
Ядерные белки опухолевых, клеток человека линий HeLa и НерG2 способны связываться с триплетными нуклеотидными
повторами типа (GСС)n>3 в 5'-регуляторных районах ряда генов млекопитающих - GCС-элементами. Промотор
гена рибосомного белка L32 (rpL32) мыши содержит GCC-элемент в позиции - 17 ... -6 пар нуклеотидов (п. н.)
относительно точки инициации транскрипции. Мы предположили, что одним из взаимодействующих с GCC-элементом
rpL32 ядерных белков HepG2 (с мол. массой около 52 кДа) может быть высококонсервативный фактор транскрипции
млекопитающих ZF5, содержащий цинк-фингерный ДНК-связывающий домен. Рекомбинантный белок GST-ZF5, содержащий
ДНК-связьшающий домен ZF5, сплавленный с бактериальной глутатион-S-трансферазой, специфически взаимодействует с
триплетными повторами (GСС)9, с консенсусной GС-богатой последовательностью для связывания с
ZF5-5'-GCGCGC-3', но особенно эффективно - с участком промотора гена rpL32 (-24 ... +11 п. н.). Высокая
аффинность связывания ZF5 с участком промотора rpL32 (-24 ... +11 п. н.), на наш взгляд, объясняется
включением в его состав по соседству с триплетными GCC-повторами достаточно выраженной "консенсусной" для
связывания ZF5 нуклеотидной последовательности. Ген кДНК Zf5 был клонирован из клеток НерG2 с использованием
метода ретро-ПЦР. В экспериментах по котрансфекции клеток HepG2 эукариотический вектор экспрессии кДНК гена
Zf5 специфически подавляет активность промотора rpL32 (-155 ... +159 п. н.), содержащего GC-богатую
нуклеотидную последовательность. Таким образом, идентифицированный нами в клетках НерG2 продукт экспрессии гена
Zf5 способен регулировать транскрипцию генов, содержащих в регуляторных районах триплетные повторы
(GСС)n (где и = 3-9).
Ключевые слова: ядерные белки опухолевых клеток человека, ОСС-триплетные повторы, фактор
транскрипции ZF 5, ОС-богатые нуклеотидные последовательности в регуляторных районах генов
Back
Contents
Main
|
