СРАВНЕНИЕ ГЕНО- И ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТОВ МЕТИЛНИТРОЗОМОЧЕВИНЫ
НА ЛИНИЯХ КЛЕТОК, ПРОФИЦИТНЫХ И ДЕФИЦИТНЫХ ПО КОРРЕКЦИОННОЙ РЕПАРАЦИИ ДНК (MMR)
В. А. Тронов,1, * И. И. Крамаренко,1 Т.Д. Смирнова,2
С. М. Терехов 2
1 Институт химической физики РАН и 2 Медико-генетический научный центр
РАМН, Москва;
* электронный адрес: tronov@chph.ras.ru
Дефицит корректирующей репарации ДНК (MMR, mismatch repair) характерен для опухолей, образующих спектр рака
толстого кишечника. В результате дефицита MMR в опухолевых клетках развиваются мутаторный фенотип и устойчивость к
цитотоксическому действию алкилирующих агентов. При химическом метилировании ДНК образуется О6-метилгуанин (О6-mG) -
модифицированное основание, ответственное на гено- и цитотоксическии эффекты алкипирующих агентов. В основе механизма
цитотоксического действия О6-mG лежат вторичные разрывы ДНК, которые формируются в ходе функционирования механизма MMR.
Мы предположили, что количество вторичных двухнитевых разрывов ДНК (ДР) в ответ на действие монофункционального метилирующего
агента может отражать эффективность функционирования системы MMR в клетке (Тронов и др., 2005). В настоящей работе исследовали
формирование вторичных ДР после действия метилирующего агента метилнитрозомочевины (МНМ) на опухолевые клетки, различающиеся по
состоянию системы MMR: HeLa (MMR-профицитные клетки карциномы эндометрия), НСТ116 (MMR-дефицитные колоректальные опухолевые
клетки) и Соlо320 (клетки опухоли сигмовидной кишки человека с неохарактеризованной системой MMR). Количество ДР определяли с
помощью метода ДНК-комет в нейтральных условиях. Цитотоксическии эффект оценивали по жизнеспособности (МТТ-тест) и по
апоптотическому индексу (частоте морфологически различимых апоптотических клеток в терминальной фазе). Показано, что
цитотоксическии эффект МНМ на клетках HeLa проявлялся на 3-й сут после действия агента. Раньше этого срока (через 48 ч) в клетках
обнаруживали ДР. MMR-дефицитные клетки НСТ116 были устойчивы к МНМ: в них не возникали ДР и отсутствовал апоптоз в течение 72 ч
после действия МНМ. Обе пинии клеток проявляли высокую чувствительность к генотоксическому действию этопозида, классическому
индуктору нерепарируемых ДР в ДНК. Этопозид индуцировал в клетках ДР (через б-12 ч) и последующий апоптоз (24 ч). По уровню
МНМ-индуцированной гено- и цитотоксичности клетки Соlо320 занимают промежуточное положение между MMR-профицитными клетками HeLa и
MMR-дефицитными НСТ116. Вместе с тем по частоте апоптоза клетки Соlо320 остаются устойчивыми к возникшим ДР. Таким образом, на
трех линиях опухолевых клеток мы наблюдали прямую корреляцию между количеством вторичных ДР, возникших в пострепликативный
период, и эффективностью системы MMR.
Ключевые слова: разрывы ДНК, коррекционная репарация, метилнитрозомочевина, апоптоз, рак толстого кишечника
Back
Contents
Main
|
