С-КОНЦЕВЫЕ САЙТЫ КАЛЬДЕСМОНА УПРАВЛЯЮТ ЦИКЛОМ ГИДРОЛИЗА АТФ,
СДВИГАЯ ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОСТОЯНИЯ АКТОМИОЗИНА К СЛАБЫМ ФОРМАМ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МИОЗИНА С АКТИНОМ
О. Е. Пронина,1 О. Копеланд,2 С. Марстон,2
Ю. С. Боровиков 1, *
1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург и
2 Национальный институт сердца и легких, Лондон, Великобритания;
* электронный адрес: boroviko@mail.cytspb.rssi.ru
С помощью метода поляризационной флуориметрии в теневых мышечных волокнах, содержащих тропомиозин, исследовали
влияние кальдесмона (CaD) и рекомбинантных пептидов CaDH1 (остатки 506-793), CaDH2 (остатки 683-767), CaDH12 (остатки 506-708),
Cg1 (остатки 658-756) и 658С (остатки 658-793) на ориентацию и подвижность флуоресцентного зонда 1.5-IAEDANS, специфически
связанного с Cys-707 субфрагмента-1 (S1) миозина в отсутствие нуклеотида и в присутствии MgADP, MgAMP-PNP, MgATPγS или
MgATP. Показано, что при моделировании различных промежуточных состояний актомиозина ориентация и подвижность диполей красителя
изменяются дискретно, что указывает на многоступенчатое изменение структурного состояния головки миозина в цикле гидролиза АТФ.
Максимальные различия в ориентации зонда на 7° и его подвижности на 30 % были обнаружены между актомиозином в присутствии MgATP и
MgADP. Актинсвязывающие сайты кальдесмона С и В' ингибируют формирование сильносвязанных состояний актомиозина, тогда как сайт В
активирует формирование этих состояний актомиозина. Предполагается, что в цикле гидролиза АТФ взаимодействие миозина с актином
инициирует зависимое от нуклеотида вращение моторного домена головки миозина и изменение ее подвижности. С-концевые
актинсвязывающие сайты кальдесмона управляют циклом гидролиза АТФ, сдвигая равновесие от сильных к слабым формам связывания
миозина с актином.
Ключевые слова: регуляция мышечного сокращения, аналоги АТФ, промежуточные состояния актомиозина, кальдесмон,
конформационные изменения субфрагмента-1 миозина, поляризация флуоресценции
Back
Contents
Main
|
