ПЕРВИЧНАЯ КУЛЬТУРА ГЕМОЦИТОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ GRYLLUS BIMACULATUS (ORTHOPTERA, GRYLLIDAE), И ИХ
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ IN VITRO С ДВУМЯ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫМИ ПАРАЗИТАМИ - PARANOSEMA GRYLLI (MICROSPORIDIA) И
ADELINA GRYLLI (COCCIDIA) *)
Ю. С. Токарев,1 Ю. Я. Соколова,2 Р. Энцерот 3
1 Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений РАСХН,
Санкт-Петербург-Пушкин, 2 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия, и 3 Технический университет,
Дрезден, Германия;
электронный адрес: jumacro@yahoo.com
Наши исследования показали, что клетки гемолимфы и гемопоэтического органа двупятнистого сверчка могут быть
выделены в кратковременную культуру и поддерживаться от нескольких часов до 27 сут без утраты морфологической целостности клеток.
Оптимальными условиями следует считать использование свежеприготовленной среды Мицухаши и Марамороша (420 мОсм, рН 7.2) с
добавлением 10 % FCS и антибиотиков и ежедневной сменой среды; по сравнению с другими вариантами в этих условиях смертность
клеток была минимальной. Клетки хорошо себя чувствуют при комнатной температуре, поэтому атмосфера диоксида углерода не является
обязательной. Клетки хорошо прикреплялись и распластывались на субстратах различного типа: стекло, пластик многолуночных
планшетов, пластик Терманокс. Оптимальная плотность клеток для 24-луночных планшетов и стекол с камерами ФЛЕКСиперм (8 лунок)
составляет 3•105 клеток на 1 лунку, а для 96-луночных планшетов - 9•104 клеток. Основное ограничение
в использовании данной модели in vitro заключается в утрате гемоцитами функциональной активности через 24-48 ч после
их выделения. В то же время способность к фагоцитозу и фенолоксидазная активность гемоцитов регистрируются в первые несколько
часов поддержания в культуре, и именно в этот период гемоциты следует использовать для физиологических экспериментов. Нам удалось
показать, что первые 12 ч культивирования гемоциты взаимодействуют с инвазионными стадиями паразитических протистов - кокцидий
Adelina grylli и Paranosema grylli. Спорозоиты A. grylli свободно проникали в гемоциты и практически все
были интернализованы через 12 ч. Споры P. grylli фагоцитировались гемоцитами сверчков in vitro, что было показано
нами ранее (Nassonova et al., 2001). Использованный в настоящей работе тест на жизнеспособность клеток позволил
продемонстрировать наличие фагоцитоза, так как только внутриклеточно локализованные споры, подобно внутриклеточным
зоитам кокцидий, вызывали характерное распределение флуоресцентного кальцеина, что свидетельствовало о
внутриклеточой локализации спор. Таким образом, кратковременная культура гемоцитов может быть использована для физиологических
и паразитологических тестов. В то же время данная экспериментальная система требует дополнительных исследований для дальнейшей
оптимизации.
*) Статья на английском языке
|
