КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ БАЛАНС МЕЖДУ Hsp70 И ЕГО КОШАПЕРОНАМИ Hdj1 И Bag1 ОПРЕДЕЛЯЕТ ЕГО
СУБСТРАТ-СВЯЗЫВАЮЩУЮ АКТИВНОСТЬ
С. С. Новоселов, Т. В. Новоселова, М. В. Вербова, Б. А. Маргулис, И. В. Гужова
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия;
электронный адрес: novoselov@mail.cytspb.rssi.ru
Одной из наиболее эффективных систем защиты клеток от неблагоприятных факторов является основной белок теплового шока
с мол. массой 70 кДа - Hsp70. Его защитная активность во многом обусловлена способностью восстанавливать правильную конформацию
поврежденных или вновь синтезированных полипептидов. В выполнении этой функции шаперону Hsp70 помогают белки Hdj1 и Bag1, позволяющие
ему производить циклы связывания-высвобождения белков-мишеней. Нами была поставлена цель исследовать взаимодействие кошаперонов Hdj1 и
Bag1 с основным шапероном Hsp70 в системе in vitro. Накопление Hsp70 и Hdj1 в клетках эритролейкемии человека К562 стимулировали
термической обработкой (43°С, 60 мин), после чего измеряли количество шаперонов с помощью иммуноблотинга и ИФА в определенные моменты
реакции клеток на тепловой шок. Произведенное с помощью оригинальной методики исследование шаперонной активности Hsp70 в экстрактах,
приготовленных из клеток в эти моменты, вместе с результатами по модуляции такой активности экзогенно добавленными кошаперонами и их
частями позволило сделать вывод о том, что изменения шаперонной активности Hsp70 регулируются его количественным соотношением с
кошаперонами, в особенности с Hdj1, при этом количество АТФ является критичным для выполнения Hsp70 его шаперонной функции.
Высокоаффинные к Hsp70 пептиды кошаперонов Hdj1 и Bag1 способны угнетать его шаперонную активность, что подтверждает возможность
такого подхода в исследовании функции Hsp70 на клеточном и организменном уровнях.
Ключевые слова: белки теплового шока, ИФА, шапероны, Hdjl, Bagl, K562
|
