ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТОВ ЯДЕРНОГО МАТРИКСА И ХРОМОСОМНОГО
СКЭФФОЛДА IN SITU
Е. В. Шеваль,1, 2 С. Ю. Курчатова,1 Э. Р. Тимирбулатова,1
В. Ю. Поляков 1, 2
1 Научно-исследовательский институт физико-химической биологии им. А. Н. Белозерского,
Московский государственный университет, и 2 Всероссийский институт сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН, Москва, Россия;
электронный адрес: vladimirpolyakov@mail.ru
Предложен метод получения препаратов ядерного матрикса и хромосомного скэффолда из культивируемых клеток животных.
Разработанная процедура экстракции позволяет сохранить интерфазные и делящиеся клетки в прикрепленном состоянии, что дает возможность
анализировать компоненты ядерного матрикса (ЯМ) и хромосомного скэффолда (ХС) на всех стадиях митотического цикла. Морфологическими
методами (фазовый контраст и электронная микроскопия ультратонких срезов) в митотических клетках после экстракции гистонов не удается
визуализировать структуры, которые можно было бы отождествить с ХС. Однако окрашивание антителами к белку ХСАР-Е и топоизомеразе
IIα выявляет в митотических клетках структуры, которые по локализации и морфологии соответствуют скэффолду. Скэффолд и ядрышки в
остаточных интерфазных ядрах не окрашивались антителами к ХСАР-Е и топоизомеразе IIα, если в пермеабилизирующем буферном растворе
присутствовали β-меркаптоэтанол, разрушающий ЯМ и ХС.
Ключевые слова: хромосома, скэффолд, ядерный матрикс
|
