ИЗУЧЕНИЕ ЯВЛЕНИЯ НЕСТАБИЛЬНОЙ ИНТЕГРАЦИИ ЧУЖЕРОДНОЙ ДНК В ГЕНОМ СОМАТИЧЕСКИХ
КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ
А. В. Иванов, И. В, Бакланова, Р. А. Пантина, М. В. Филатов1
С.-Петербургский институт ядерной физики РАН, Гатчина, Россия;
1 e-mail: filatov@omrb.pnpi.spb.ru
В работе исследуется феномен потери экзогенной ДНК, интегрированной в геном соматических клеток
млекопитающих. Обнаружено, что чужеродная ДНК, встроившаяся в геном клеток в результате трансфекции методом
электропорации, может теряться с частотой, варьирующей от 1/100 до 1/100 000 на клеточное деление в процессе пассирования
клеток. Это явление наблюдается в клеточных линиях различного видового происхождения, оно продемонстрировано на клетках
китайского хомячка А23 и фибробластов человека AG 11395, а также на клетках эмбриональной тератокарциномы мыши F9.
Сходные результаты были получены с использованием различных плазмидных векторов: р16, р39, pATR4 и pcDNA3.1-Higr(WRN).
Интеграцию плазмидной ДНК в геном прослеживали по приобретению селективных признаков - либо устойчивости клеток к G418
и гигромицину В, либо чувствительности к ганцик-ловиру, обусловленной экспрессией гена тимидинкиназы вируса простого герпеса.
Утрату этих селективных маркеров интерпретировали как результат потери из генома обусловливающих их генетических
конструкций. Наличие или отсутствие трансгенной ДНК в геноме подтверждали с помощью метода ПЦР. ПЦР-анализ показал,
что в случае потери селективных признаков можно говорить об истинном удалении инородной ДНК из генома, а не о снижении
экспрессии введенных генов. Обнаружено, что при наличии интегрированной экзогенной ДНК двух сцепленных генов может
происходить утрата как обоих селективных генов, так и только одного из двух сцепленных интегрированных генов. Эти наблюдения
позволяют прийти к выводу о том, что феномен избирательной потери чужеродной ДНК, встроившейся в геном клеток
млекопитающих, является достаточно общим явлением.
Ключевые слова: нестабильность интеграции чужеродной ДНК, клетки млекопитающих, трансфекция
Back
Contents
Main
|
