ДИНАМИКА ШАПЕРОННЫХ КОМПЛЕКСОВ Hsp70 С БЕЛКАМИ-ПОМОЩНИКАМИ Hdj1 И Bag1 В РЕАКЦИИ КЛЕТОК
ЭРИТРОЛЕЙКЕМИИ ЧЕЛОВЕКА К562 НА ТЕПЛОВОЙ СТРЕСС
С С. Новоселов, Т. В. Новоселова, О. С. Москалева, Б. А. Маргулис,
И. В. Гужова
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия;
электронный адрес: novoselov@mail.cytspb.rssi.ru
Значительную роль в защите клеток от неблагоприятных факторов играет основной белок теплового шока с
мол. массой 70 кДа - Hsp70. Его защитная активность во многом обусловлена способностью восстанавливать правильную
конформацию поврежденных или вновь синтезированных полипептидов. В выполнении этой функции шаперону Hsp70 помогают
белки Hdj1 и Bag1, позволяющие ему производить циклы связывания-высвобождения белков-мишеней. Нами была поставлена
цель исследовать взаимодействие кошаперонов Hdj1 и Bag1 с основным шапероном Hsp70 в системе in vivo. Накопление Hsp70
в клетках эритролейкемии человека К562 стимулировали термической обработкой (43°С, 60 мин) и в определенные сроки после
нагрева отбирали пробы для биохимического и микроскопического анализов. Результаты иммуноблотинга показали, что в клетках,
подвергнутых нагреванию, количество и Hsp70, и Hdj1 возрастает и находится на высоком уровне в течение 24 ч, после чего
снижается. Период, характеризовавшийся значительными изменениями концентрации Hsp70, был разбит на несколько этапов,
на которых выявлялись комплексы шаперона с белками Hdj1 и Bag1. Из данных перекрестной иммунопреципитации с
последующим иммуноблотингом и конфокальной микроскопии следует, что на ранних этапах реакции клеток на тепловую
обработку доминирует связывание Hsp70 с Hdj1; позднее выявляются комплексы преимущественно с белком Bag1. Это говорит
о динамичности шаперонных комплексов, образующихся при развитии реакции на стресс, как по их составу, так и по локализации
в клетке.
Ключевые слова: белки теплового шока, реципрокная коиммунопреципитация, конфокальная микроскопия,
Hdj1, Bag1, K562
Back
Contents
Main
