ТОМ 46 (2004), № 1, c. 43-52

ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ НЕКОТОРЫХ БЕЛКОВ ПОСТРЕПЛИКАТИВНОИ РЕПАРАЦИИ ДНК В КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПОСЛЕ ОБРАБОТКИ КАНЦЕРОГЕНАМИ А. А. Никифоров,1* М. П. Светлова,1 Л. В. Соловьева,1 М. Циглер,2 Ш. Оеи,2 Н. Николаишвили-Файнберг,3 М. Кордейро-Стоун,3 Н. В. Томилин1 1 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия, 2 Институт биохимии Свободного университета, Берлин, Германия, и 3 Университет Северной Каролины, Чапел Хил, США; * электронный адрес: nikiforovan@hotmail.com Многие повреждения в матричных нитях ДНК блокируют основные репликативные ДНК-полимеразы и вызывают блокировку продвижения репликативных вилок. Этот блок может быть преодолен при помощи особых ДНК-полимераз (например, ДНК-полимеразы η, или Polη), способных осуществлять синтез на поврежденной матрице ДНК. Пострепликативной репарацией ДНК (ПРР) называют механизмы, позволяющие завершить раунд репликации ДНК даже в присутствии повреждений в матричной нити. В дрожжах Saccharomyces cerevisiae основным регулятором безошибочной и мутагенной ПРР является белковый комплекс Rad6-Rad18, который убиквитинирует белок PCNA. В клетках млекопитающих Polη накапливается в заблокированных фокусах репликации, однако механизм этого накопления неизвестен. Роlη имеет консервативный блок связывания с PCNA, и фосфорилирование этого блока может быть существенным для ее взаимодействия с PCNA. Ранее мы показали, что ингибитор протеинкиназ стауроспорин подавляет ПРР в клетках человека. В настоящей работе мы проверяли гипотезу о том, что причиной накопления Роlη после повреждения ДНК в заблокированных фокусах репликации является ее фосфорилирование, а также исследовали индуцированное повреждениями ДНК фосфорилирование белка hRad18 (human Rad18), конъюгированного с зеленым флуоресцентным белком (GFP), и его накопление в репликативных фокусах. Полученные результаты указывают на следующее: 1) Polη не фосфорилируется в ответ на УФ-облучение или обработку клеток метилметансульфонатом (ММС), однако ее диффузионная мобильность в ядре несколько уменьшается во время ПРР; 2) белок hRad18 накапливается в клетках, обработанных ММС, причем значительная его часть колокализуется в заблокированных фокусах репликации с нерастворимым в детергенте PCNA; накопление hRad18 в клетках после действия ММС подавляется стауроспорином. На основании этих данных можно сделать предположение о том, что чувствительным к стауроспорину этапом ПРР является фосфорилирование белка hRad18. Ключевые слова:  пострепликативная репарация ДНК, ДНК-полимераза η, белок hRad18 Back    Contents    Main