ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА RT-PCR В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ
МАЛЫХ СТАБИЛЬНЫХ РНК В КЛЕТКАХ ЭПИДЕРМОИДНОЙ КАРЦИНОМЫ ЧЕЛОВЕКА А431
Т. В. Никитина,1,3 Н. Ю. Назарова,2 Л. И. Тищенко,1
П. Туохимаа,2 В.М. Седова 3
1 Кафедра биохимии С.-Петербургского государственного университета,
2 Медицинская школа Университета г. Тампере, Финляндия, и
3 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург;
электронный адрес: sedova@mail.cytspb.rssi.ru
Для исследования уровня содержания in vivo малых стабильных РНК, синтезируемых ДНК-зависимой
РНК-полимеразой III, был применен метод RT-PCR в реальном времени с использованием флуоресцентного красителя
SYBR Green I. RT-PCR в реальном времени в настоящее время является самым чувствительным и точным методом
количественного определения РНК в клетке и широко используется для изучения матричных РНК. Был исследован уровень
экспрессии генов 5S рРНК, тРНК и А/м-последовательности в клетках эпидермоидной карциномы человека А431,
находящихся в различных состояниях: с удлиненным временем генерации при культивировании в бессывороточной среде,
активированных ЭФР в низкой концентрации и находящихся в состоянии апоптоза, вызванного ЭФР в высокой концентрации.
В случае каждой конкретной РНК были оптимизированы условия (количество кДНК и концентрация специфичных праймеров)
проведения амплификации соответствующей кДНК с учетом уровня содержания данной РНК в клетке. В результате
проведенного исследования нами было показано, что экспрессия различных генов класса III - генов 5S рРНК,
тРНКiМet1 и Alu-последовательности - по-разному регулируется при воздействии на клетку внешних
стимулов, вызывающих удлинение времени генерации, активацию или апоптоз. Таким образом, метод RT-PCR в реальном
времени весьма перспективен для изучения содержания в клетке не только матричных, но и малых стабильных РНК.
Ключевые слова: метод RT-PCR в реальном времени, уровень экспрессии генов класса III, малые
стабильные РНК
Back
Contents
Main
|
