ИММУНОЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ БЕЛКОВ
НА ПОЛИТЕННЫХ ХРОМОСОМАХ ДРОЗОФИЛЫ С ПОМОЩЬЮ ИММУННОЙ ТЕХНИКИ МЕЧЕНИЯ ЗОЛОТОМ
В. Ф. Семешин,1 * В. В. Шлома,1 Е. Н. Андреева,1
X. Саумвебер,2 И. Ф. Жимулев 1
1 Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, 630090, Россия;
2 Университет Гумбольдта, Берлин, 10115, Германия;
* электронный адрес: semeshin@bionet.nsc.ru
Используя антитела, меченные золотом, разработали и апробировали иммуноэлектронно-микроско-пический (ИЭМ) метод
локализации белков на политенных хромосомах Drosophila melanogaster, в основу которого взяты процедуры,
широко применяемые для непрямого иммунофлуоресцентного (ИФ) окрашивания давленых препаратов хромосом. Возможности
ИЭМ-метода оценивали с помощью специфических антител против белков, ранее локализованных как в деконденсированных
районах (в междисках и пуффах), так и в компактных районах (дисках) политенных хромосом. Во всех экспериментах
данные ИЭМ сравнивали с результатами ИФ-окрашивания для одноименных районов хромосом. Для разрыхленных районов
хромосом показано, что ИЭМ позволяет с высокой точностью осуществить локализацию сигнала в тонких дисках,
междисках и пуффах, что соответствует данным ИФ-окрашивания. Такое соответствие, однако, отсутствует для плотных
дисков: в компактных структурах с яркой флуоресценцией мечение золотом выявляется лишь по краям этих структур и
отсутствует в их внутренних частях. Наблюдаемый эффект обусловлен, вероятно, плохим проникновением антител,
конъюгированных с частицами золота, в плотно упакованные структуры. Полученные данные позволяют заключить, что
использование ИЭМ-метода для тонкой топографии белков на политенных хромосомах ограничено декомпактизованными
районами, что следует учитывать при проведении ИЭМ-работ по локализации белков на политенных хромосомах.
Ключевые слова: антитела, иммуноэлектронная микроскопия, локализация белков, политенные хромосомы
Back
Contents
Main
|
