ИЗУЧЕНИЕ БЕЛКОВ ОБОЛОЧКИ СПОР И ПОЛЯРНОЙ ТРУБКИ МИКРОСПОРИДИИ
NOSEMA GRYLLI: ВЫСВОБОЖДЕНИЕ ОСНОВНОГО БЕЛКА ОБОЛОЧКИ СПОР ПРЕДШЕСТВУЕТ ПРОЦЕССУ ЭКСТРУЗИИ
В. В. Долгих, П. Б. Семенов
Всероссийский научно-исследовательский институт зашиты растений Санкт-Петербург-Пушкин;
электронный адрес: dollslav@yahoo.com
Инкубация спор микроспоридии Nosema grylli в растворе, содержащем 10 мМ КОН и 170 мМ КС1, приводит к
высвобождению в среду в растворенном виде (солюбилизации) значительных количеств белка оболочки спор с мол. массой
40 кДа (р40). Присутствие обоих компонентов среды является необходимым условием для солюбилизации р40. Инкубация
спор в присутствии 170 мМ КСl не вызывает появления в среде каких-либо белков, тогда как обработка спор 10 мМ КОН
приводит к высвобождению большого числа белков, но лишь незначительных количеств р40. Длительное хранение спор
(более 1 года) в воде или 0.02 %-ном растворе азида натрия сопровождается значительным снижением в них содержания
р40. Специфичные к р40 поликлональные антитела были получены в результате иммунизации кроликов выделенным белком.
Высокий титр антител в сыворотке и их специфичность были продемонстрированы методом иммуноблотинга. Реагирующий с
антителами белок с мол. массой около 40 кДа присутствовал в нерастворимой фракции спор и внутриклеточных стадий.
Иммунофлуоресцентный анализ выявил присутствие р40 на оболочке споронтов и споробластов. При этом лишь часть спор
реагировала с антителами, что может быть связано со сменой состава поверхностных антигенов в ходе созревания спор.
Солюбилизация значительных количеств р40 в щелочном солевом растворе может быть связана с процессом экструзии
полярных трубок и спороплазм, поскольку последующий перенос спор в нейтральную среду приводит к их герминации.
Последовательная отмывка спор после экструзии в растворах 1-3 %-ного додецилсульфата натрия (ДСН), 9 М мочевины и
инкубация в 100%-ном 2-меркаитоэтаноле (2-МЭ) вызывают солюбилизацию полярных трубок и избирательное высвобождение
белка массой 56 кДа (р56). Максимальная концентрация 2-МЕ является важным условием полноты очистки этого белка.
В работе приведены данные, подтверждающие, что р56 является белком полярной трубки микроспоридии N. grylli.
Солюбилизация полярных трубок в растворе 2-МЕ в присутствии ДНС вызывает высвобождение наряду с р56 четырех других
белков, которые имеют мол. массы около 46, 34, 21 и 15 кДа и, возможно, также являются белками полярной трубки.
Ключевые слова: белки, Microsporidia, оболочка споры, полярная трубка
Back
Contents
Main
